165957. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-(D-5-amino-5-karboxivaleramido)-3-(karbamoiloximetil)-7-metoxi-3-cefém-4-karbonsav előállítására fermentációval

7 165957 8 golás a fermentálás folyamatának korábbi szakaszában történik, vagy nem észlelhető fokozott hatás, vagypedig gátlóhatás érvényesül. Ezzel ellentétben, ha az alkalmazott tenyészet Streptomyces clavuligerus és az adalékanyag nátriumtioszulfát, az említett adalékanyagnak sem az adagolási ideje, sem a koncentrációja nem kritikus. A nátriumtioszulfát általában az antibiotikum-termelést átlagban mintegy 40%-kal növeli, függetlnül attól, hogy az adalékanyagot a fer- 10 mentálás kezdetén vagy a beoltás után visszük be. De különösen jó antibiotikum hozamok érhetők el ezzel az adalékanyaggal 0,20-0,60% (súly/térfogat) koncentrációk esetén. Nátriumditionit és Streptomyces clavuligerus 15 tenyészet használatával az adagolási idő kritikus. A ditionit az antibiotikum szintézisét az esetben serkenti, ha az adalékanyagot néhány órával, általában 24-31 órával a beoltás után visszük be, de a mikroorganizmus szaporodását gátolja, ha az 20 adalékvegyületet a fermentálás megindulásakor visszük be. Általában 0,005-0,075% (súly/térfogat) ditionit jó eredménnyel használható, különösen jó antibiotikum hozam érhető el, ha e vegyületet 24—31 órával a beoltás után 25 0,025-0,050% koncentrációban adagoljuk a termelő közeghez. Streptomyces clavuligerus használata esetén is 0,005-0,6% körüli tioszulfát és 0,01-0,4% körüli L-a-aminoadipinsav kombinált adagolása általában 30 nagyobb mértékben serkenti az antibiotikum termelést, mint egyedül a tioszulfát. E tekintetben különösen alkalmasnak találjuk 0,20% nátriumtioszulfát és 0,05% L-a-aminoadipinsav (súly/térfogat) mennyiségét az antibotikum hozamának fo- 35 kozására, amennyiben azokat a fermentálási folyamat kezdetén visszük be. A Streptomyces clavuligerus tenyészethez egyedül használva az L-a-aminoadipinsavat, azt tapasztaljuk, hogy 0,01%-0,4% (súly/térfogat) körüli 40 adalékanyag fokozza az antibiotikum termelést, de előnyösebben a 0,025-0,05% mennyiség eredményez kiemelkedő hozamot. A közeg, amelyhez a tioszulfátot, ditionitot és az a-aminoadipinsavat adjuk, bármely megfelelő 45 vizes tápközeg lehet, bizonyos közegek azonban — ezeknek az adalékanyagoknak a kombinációival adalékolva — különösen jó antibiotikum hozamot eredményeznek. így például meglepő módon azt találtuk, hogy a Streptomyces clavuligerus tenyészet maximális hozamot ad a következő közegben: I. közeg: Keményítő 4,8% Desztillációs maradék 0,5% Szójabab-dara 0,21% Glicerin 0,8% Hidrolizált kazein (N-Z amin, A-típus)x 0,5% vas(II)szulfát-heptahidrát 0,01% Csapvíz 1,0 liter Ugyanakkor a Streptomyces lactamdurans különösen jó hozamot ad antibiotikumra a II. közegben: 5 II. közeg: Desztillációs maradék 3,0% Eredeti szárított élesztő 1,0% Mobil Par-S habzásgátló 0,25% (Mobil Oil Company, New York) glicin 0,05% L-fenilalanin 0,30% Kukoricakeményítő 2,0% Ionmentes víz 1,0 liter A fent kifejtettek elsősorban a különleges Streptomyces lactamdurans és Streptomyces clavuligerus törzstenyészetekkel végrehajtott fermentálásokra vonatkoznak. A jelen találmány ismertetését követve az adalékanyagok optimális szintjének vagy a fermentáló közegbe való bevitelének időpontját érintő módosítások vagy változtatások a szakember szaktudásához tartoznak, függetlenül attól, hogy a Streptomyces lactamdurans vagy a Streptomyces clavuligerus törzset használjuk a 7 - ( D - 5 -amino- 5-karboxivaleramido)-3-(karbamoiloximetil)-7-metoxi-3-cefém-4-karbonsav antibiotikum termelésére. 50 XN—Z amin. A-típus: kazein enzimes kivonata, gyártja a Sheffield Chemical Co., Norwick, New York. 55 60 65 Bár a találmány tárgyát képező antibiotikum előállítható felszíni és felszín alatti tenyészetekkel egyaránt, jelenleg előnyösebb a fermentálás felszín alatti állapotban való kivitelezése. Kisméretű fermentálások megfelelően végezhetők el oly módon, hogy a tápközeg alkalmas mennyiségeit lombikokba helyezzük, a lombikokat és tartalmukat 120 C°-ra hevítve sterilizáljuk, a lombikok tartalmát beoltjuk a 7-(D-5-amino-5-karboxivaleramido)-3-(karbamoiloximetil)-7-metoxi-3-cefém-4-karbonsavat termelő Streptomyces törzs spóráival vagy vegetatív sejtszaporulatával, a lombikok nyílását vattával lazán ledugaszoljuk, és állandó, 28 C° körüli hőmérsékleten 3—5 napig fermentáljuk. Nagy méretben való fermentáláskor a fermentálás folyamatát előnyösen keverővel és a fermentáló közeg levegőztetésére szolgáló szerkezettel felszerelt készülékben végezhetjük. E módszernek megfelelően a tápközeget a tartályba töltjük és 120 C° hőmérsékleten sterilizáljuk. Lehűtés után a sterilizált közeget megfelelő eredetű Streptomyces törzs vegetatív sejtszaporulatával beoltjuk és a fermentálást 2—4 napig folytatjuk, miközben gondoskodunk a tápközeg keveréséről és/vagy levegőztetéséről. Fermentálás közben a hőmérsékletet 28 C° körüli értéken tartjuk. A 7-(D-5-amino-5--karboxivaleramido)-3-(karbamoiloximetil)-7-metoxi-3-cefém-4-karbonsav ezen előállítási módszere különösen alkalmas az új antibiotikum nagy mennyiségeinek termelésére. A 7-(D-5-amino-5-karboxivaleramido)-3-karbamoiloximetil)-7-metoxi-3-cefém-4-karbonsavat termelő mikroorganizmus használatával a fermentálás 20-37 C° közötti hőmérsékleten végezhető. Op-4