165733. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a vér kalciumszintjét leszállító hatású polipeptidek előállítására
165733 ., IS 16 HD°=-12°, metanolban. e)Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Asp(OTB)-Leu-NHNH2 26,6 g Z-Ser-Gln-Asp(OTB)-Leu-OMe-t feloldunk 1 liter metanol és dimetilformamid elegyben, 5 g 10%-os palládiumszenet 100 ml vízben szuszpendálunk, hozzáadjuk az oldathoz, és katalitikusan hidrogénezzük. A számított mennyiségű hidrogén 1 óra alatt elfogy. A katalizátort kiszűrjük, és a metanol eltávolítására a szűrletet besűrítjük. 29,6 g Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-NHNH2 -t feloldunk 150 ml dimetilformamidban. —20°-ra lehűtjük, és hozzáadunk 26,2 ml 5n éteres sósavat és 5,3 ml terc-butilnitritet. 10 perc keverés után 18,5 ml trietilamint és a fent kapott besűrített H-Ser-Gln-Asp(OTB)-Leu-OMe oldatot hozzáadjuk. Szobahőmérsékleten 4 óra hosszat keverjük, majd a kivált trietilamin-hidrokloridot kiszűrjük, és a szűrletet teljesen bepároljuk. A szilárd maradékot éterrel eldörzsöljük, és leszívatjuk, mire por marad vissza. Ezt a nyersterméket kovasavgél oszlopon. 95 :5 arányú kloroform és metanol eleggyel való szűréssel tisztítjuk. Trt ~Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Asp(OTB)-Leu-OMe-t kapunk. Olvadáspontja: 217°, [a]b° = -30°, metanolban. A heptapeptidet feloldjuk 400 ml metanolban, hozzáadunk 1,4 ml hidrazinhidrátot, és 48 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük. A kivált hidrazidot kiszűrjük, éterrel mossuk, és súlyállandóságig szárítjuk. Olvadáspontja: 218°, [Ű]D° = —16°, dimetilformamidban. Gt szekvenciarész: Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Asp(OTB)-Leu-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Phe-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 • 2CH 3 COO • 3H 2 0 2,43 g heptapeptidet (Fi szekvenciarész) feloldunk 30 ml dimetilformamidban. — 20°-ra való lehűtés után hozzáadunk 1,45 ml 5 n éteres sósavat, és 0,252 ml terc-butilnitritet. Még 10 percig keverjük, majd 1,01 ml trietilaminnal semlegesítjük. Az Ei hexadekapeptidet feloldjuk 50 ml dimetilformamidban, és hozzáadjuk a heptapeptidazid oldathoz. Szobahőmérsékleten való 4 órás keverés után a kivált trietilaminhidrokloridot leszívatjuk, és a szűrletet teljesen bepároljuk. A maradékot kevés metanolban melegen feloldjuk, és éter hozzáadásával leválasztjuk. A nyersterméket kovasavgél oszlopon kromatografáljuk, és kloroform, metanol és víz eleggyel eluáljuk. A cím szerinti vegyületet kapjuk. Olvadáspontja: 225°, [a]D°=-18°, dimetilformamidban. G2 szekvenciarész: Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Asp(OTB)-Leu-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Phe-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ala-Gly-Val-Pro-NH2 • 2CH 3 COOH • 3H2 0 A Gj szekvencíarész előállításával analóg módon az Fi heptapeptid szekvenciarészből és az E2 hexadekapeptid szekvenciarészből a cím szerinti vegyületet kapjuk. Olvadáspontja: 216° [a]o0 = -19°, dimetilformamidban. 5 2. Célvegyületek előállítása 1. példa H-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-10 -Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Asp-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Phe-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 650 mg trikozapeptidet (Gi szekvenciarész) 15 feloldunk 30 ml 60%-os ecetsavban, és 16 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Víz hozzáadása után több ízben éterrel mossuk. Az éteres fázist választótölcsérben elválasztjuk. A vizes fázis térfogata kb. 20 ml, és elbomlott 20 trikozapeptiden kívül nyomokban visszamaradt ecetsavat tartalmaz. Ezt Amberlite-IRA acetáttípusú oszlopon átbocsátjuk, az oszlopot kb. 40 ml vízzel utánamossuk, és az oldatot bepárqljuk. 25 , , 295 mg BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-OH-t [előállítását közli a Helv. Chim. Acta 52, 1794 (1969)] feloldunk 10 ml dimetilszulfoxid és dimetilformamid elegyben, 30 hozzáadunk 131 mg N-hidroxiszukcinimidet és 59 mg diciklohexilkarbodiimidet, és 6 óra állás után a kivált diciklohexilkarbamidot kiszűrjük. A Trt-védőcsoportok lehasítására fent előállított trikozapeptidet feloldjuk 10 ml dimetilformamidban, 35 és a szüredékhez adjuk. Szobahőmérsékleten 48 óra állás után a terméket éter hozzáadásával leválasztjuk, és a felülúszó oldatot leöntjük. A csapadékot kevés metanolban oldjuk, és éter ismételt hozzáadásával porrá alakítjuk. Leszívatás 40 és szárítás után a védett nyers dotriakontapeptid 220 mg-ját feloldjuk 4 ml metilénklorid-trifluorecetsav-víz elegyben. Az oldatot szobahőmérsékleten való 1 órás állás után teljesen bepároljuk. A maradékot 0,2 n ecetsavban oldjuk, 45 és P6 -biogél oszlopon szűrjük (1x300 cm). Az eluálást 0,2 n ecetsavval végezzük. Az egyesített tiszta frakciókat bepároljuk, majd liofilizáljuk. A címben megnevezett vegyületet kapjuk. Olvadásponja: 215° (bomlik), [Í*]D0 =-75 O , n ecetsavban. 50 Kitermelés: 220 mg védett dotriákontapeptidből 100-110 mg tiszta terméket kapunk. Aminosavösszetétel savas hidrolízis után (6n sav, 16 óra): Asp 3,1, Thr 3,7, Ser 2,8, Gin 1,9, Pro 2,0, Gly 2,9, Ala 1,0, Cys 1,6, Val 2,0, Leu 55 5,2, Phe 1,0, His 1,0, Lys 2,0, Arg 0,9. 2. példa 60 H-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Asp-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Phe-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ala-Gly-Val-Pro-NH2 300 mg trikozapeptidet (G2 szekvenciarész) 65 feloldunk 15 ml 60%-os ecetsavban és 16 óra 8
