165727. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peroxidáz enzim előállítására
165727 5 6 1. példa 1000 kg konzervipari hulladékként kapott tormagyökér-hántalékot extrahálunk először 2 m3 vízzel, majd másodszor 1 m3 vízzel. Az extrahált 5 rostmaradékot dobszűrőn eltávolítjuk. Az így kapott 3000 liter szűrletet gyorsbepárlón vákuumban, 40 °C-on 500 literre betöményítjük. A sűrítményt folyóvízzel szemben négy napon át folyamatosan dializáljuk. A kb. 600 1 térfogatú diali- 10 zátumhoz azonos térfogatú aoetont adunk. A keletkezett csapadékot a szűrőcentrifugán eltávolítjuk. A szűrlethez hozzáadunk a dializátum térfogatára számított 5 térfogat acetont, majd az anyagot a kiváló csapadék tömörítése céljából egy 15 napon át állni hagyjuk. A tiszta oldószeres felülúszót dekantáljuk, és regenerálás céljából gyűjtjük. A csapadékot centrifugán tömörítve elválasztjuk, szűrőn vízmentes acetonnal átmossuk, és foszforpentoxid felett vákuumban szárítjuk. A szárított 20 szűrőn vízmetes acetonnal átmossuk és foszforpentoxid felett vákuumban szárítjuk. A szárított nyerstermék súlya: 2010 g, aktivitása: 108 egys./mg; RZ: 0,35. A termékből 10 s/tf%-os desztillált vizes olda- 25 tot készítünk. Hozzáadunk a bemért nyers termék súlyával megegyező mennyiségű, két hónapon át „öregített" Ca-foszfát-gélt, melynek mennyiségét 110 °C-on végzett szárítás után gravimetriás úton határoztuk meg. A nyerstermék oldalát a 30 géllel együtt állni hagyjuk, majd centrifugáljuk, és az üledéket eldobjuk. A felülúszó oldatból a tiszta terméket 5 térfogat 96%-os etanol hozzáadásával csapjuk ki. A csapadékot centrifugálással kiülepítjük, majd absz. etanollal mossuk és 35 vákuumban szárítjuk. A végtermék súlya: 423 g, aktivitása: 248 egys./mg; RZ: 0,66. 2. példa 300 kg szárított tormaport 24 órán át áztatunk 40 2 m3 vízben. A torma maradékot dobszűrőn eltávolítjuk. A nyert, mintegy 1500 liter szűrletet az 1. példa szerinti módon kb. 400 literre betöményítjük. A sűrítményt négy napon át dializáljuk, folyóvízzel szemben, majd a dializátumot gyors- 45 bepárlón vákuumban 40 °C-on mintegy harmad térfogatra besűrítjük. A sűrítményhez hozzáadunk azonos térfogatú 96%-os etanolt, és a keletkezett csapadékot dobcentrifugán eltávolítjuk. Hozzáadunk a sűrítmény térfogatára számítva 5 tér- 50 fogat etanolt, majd egy napon át állni hagyjuk. A csapadékot centrifugán összegyűjtve absz. etanollal vízmentesítjük, ós vákuumban szárítjuk. A nyers termék súlya: 1956 g, aktivitása: 76 egys./mg; RZ: 0,38. 55 A nyers terméket az 1. példa szerinti módon Ca-foszfát géllel tisztítjuk. A végtermék súlya: 222 g, aktivitása 218 egys./mg; RZ: 0,63. A kiadásért felel: a Közgazdasági 75.6399/4 — Zrínyi Nyomda, Budapest. 3. példa 1000 kg nedves tormaport először 5 m3 , majd 2 m3 vízzel extrahálunk, és a rostmaradékot dobszűrőn eltávolítjuk. Az extraktumot az 1. példa szerinti módon 250 literre bepároljuk, majd négy napon át folyóvízzel szemben dializáljuk. A dializátumot a 2. példában megadottak szerint harmad térfogatra betöményítjük. Az így készített sűrítményebői a 2. példa szerinti módon állítjuk elő a nyers terméket alkoholos frakcionált kicsapással. A termék súlya: 1426 g, aktivitása: 93 egys./mg; RZ: 0,35. A nyers terméket az 1. példa szerinti módon Ca-foszfát-géllel tisztítjuk. A végtermék súlya: 285 g, aktivitása: 244 egys./mg; RZ: 0,67. 4. példa 500 liter élelmiszeripari tormafehérítő lét dobcentifugán megtisztítunk a növényi maradékoktól. A szűrletet négy napon át dializáljuk folyóvízzel szemben. A dializátumot az 1. példa szerinti módon mintegy 150 literre bepároljuk. A sűrítményből a végterméket a 2. példa szerinti módon állítjuk elő alkoholos frakckonált kicsapással. A termék súlya: 728 g; aktivitása: 178 egys^mg; RZ: 0,79. 5. példa 500 liter konzervipari tormamosólét dobcentrifugán megtisztítunk a növényi részektől. A szűrletet az 1. példa szerinti módon betöményítjük kb. 200 literre. A sűrítményt négy napon át dializáljuk folyó vízzel szemben. A dializátumból a végterméket az 1. példa szerinti módon acetonos frakcionált kicsapással állítjuk elő. A végtermék súlya: 920 g, aktivitása: 146 egys./mg; RZ: 0,81. Szabadalmi igénypont Eljárás peroxidáz enzim előállítására, azzal jellemezve, hogy tormagyökér felületéről lehántott héjréteget, vagy szárított vagy nedves tormaport önmagában ismert módon vízzel extrahálunk, a kapott extraktumot vagy élelmiszeripari tormafehérítő, ill. -mosófolyadékot 60 °C alatti, előnyösen 40—45 °C hőmérsékleten, vákuumban, eredeti térfogatának legfeljebb 1l l5 -ére betöményítjük, az így kapott sűrítményből vízzel szemben végzett közvetlen dialízissel peroxidáz enzimoldatot állítunk elő, és a kapott dializátumot adott esetben 60 °C alatti hőmérsékleten vákuumban, térfogatának legfeljebb 1 / 20 -ára töményítjük, majd az oldatból a peroxidázt önmagában ismert módon frakcionáltan kicsapjuk. és Jogi Könyvkiadó Igazgatója — F. v.: Bolgár Imre vezérigazgató
