165686. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új monokromon- 2-karbonsav származékok, valamint az új vegyületeket tartalmazó gyógyszer készítmények előállítására
165686 33 34 Spektrumvizsgálat Molekulasúly = 222 tömegspektroszkópiai mérés alapján. A C13 H 18 0 3 képletből számítva a molekulasúly 222. b) 6,8-dietil-5-metoxi-4-oxo-4H-1 -benzopirán-2--karbonsav 13,8 rész nátrium 300 rész etanolos oldatát 32 rész 3,5-dietil-2-hidroxi-6-metoxiacetofenon és 99 tórfogatrósz dietiloxalát 300 rész éteres kevert oldatához adjuk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 2,5 órán át keverjük, majd 100 rész kloroform, 300 rész víz ós 60 rész tömény sósav kevert elegyébe öntjük. A kloroformos fázist elválasztjuk, és az oldószert lepárolva egy olajat nyerünk, melyet 95 tf/tf %-os etanolos, tömény kénsavat tartalmazó oldattal négy órán át visszacsepegő hűtő alkalmazása mellett forralunk. Az etanolt lepárolva egy maradékot nyerünk, melyet feleslegben levő nátriumhidrogénkarbonát-oldattal egy órán át visszafolyatás mellett forralunk. Lehűtés után az elegyet tömény sósavval megsavanyítjuk, és kloroformmal extraháljuk. A kloroform lepárlása és a maradéknak petroléterrel történő triturálása után 17,6 rész 6,8-dietil-5-metoxi-4-oxo-4H-l-benzopirán-2-karbonsavat kapunk, o.p. 199—200 °C (kloroform-petroléter elegyből történő átkristályosítás után). Analízis: C15 H 16 0 5 -re mért: C 64,4; H 5,9%; számítva: C 65,2; H 5,8%. Spektrumvizsgálat Molekulasúly 276 tömegspektroszkópiai vizsgálat alapján, C15 H 16 O g képletből 276 adódik. c) 6,8-dietil-5-hidroxi-4-oxo-4H-l-benzopirán-2--karbonsav 5 rész 6,8-dietil-5-metoxi-4-oxo-4H-l-benzopirán-2-karbonsav és 130 térfogatrész 48%-os vizes hidrogénbromidoldat elegyét 7 órán át visszafolyatás közben forraljuk. A reakcióelegyet lehűtjük, és feleslegben nátriumhidrogénkarbonát-oldatot adunk hozzá. Az oldatot tömény sósavval megsavanyítjuk, majd kloroformmal extraháljuk. A kloroform bepárlásával egy maradékot kapunk, melyet petroléterrel triturálunk, és így 2,3 rész 6,8-dietil-5-hidroxi-4-oxo-4H-l-benzopirán-2-karbonsavat kapunk, p.o. 218—220 °C (etanolból történő átkristályosítás után). Analízis: C14 H 14 0 5 -re mért: C 63,8; H 5,6%; számítva: C 64,1; H 5,3%. Spektrum vizsgálat Molekulasúly = 262 tömegspektroszkópiai vizsgálat alapján, A C14 H 14 0 5 képletből 262 adódik. A példa Az alábbiakban ismertetett eljárás segítségével megállapíthatjuk a találmány szerinti vegyületeknek az allergiás sokk farmakológiai mediátorainak kiválasztását gátló hatását. A vizsgálat során a vegyületeknek a passzív bőr allergiás sokk reakcióra kifejtett gátló hatását pat-5 kányokon vizsgáljuk. Bebizonyosodott, hogy ezt a vizsgálati módszer megbízható minőségi kimutatását teszi lehetővé a vizsgálandó vegyületeknek emberben kiváltott antitest-antigén reakciót gátló hatásának. 10 A vizsgálati módszerben Charles River France/Fisons által tenyésztett hím vagy nőstény 100—150 g testsúlyú patkányokat hetenkénti intervallumokban szubkután Necator brasiliensis lárvákkal fertőztünk, 2000—12 000 lárva/állat dózishatárok 15 között, hogy a ferőzést létrehozzuk. 8 hét után az állatokból a szívük megcsapolásával vért vettünk, és mindegyik állattól 15—20 ml vért gyűjtöttünk össze. A mintákat 30 percig 3500 ford./perc-es sebességgel centrifugálva a vértesteket eltávolítot-20 tuk a vérplazmától. A szérumot összegyűjtöttük, és N. brasiliensis antitesteket tartalmazó szérumként használtuk. Egy tájékoztató vizsgálatot végeztünk, hogy meghatározzuk a szérumnak azt a legkisebb mennyiségét, amely a kontrollálatokban az aláb-25 biakban leírt vizsgálat során 2 cm-nél kisebb átmérőjű bőrelváltozást okoz. Úgy találtuk, hogy a 100—130 g testsúlyú patkányok optimális érzékenysége akkor lép fel, ha a szérumot 8 rész fiziológiás sóoldattal hígítottuk. Ezt a hígított oldatot 30 neveztük A antitest szérumnak. Az A szérummal reagáló antigént úgy állítottuk elő, hogy az N. brasiliensis lárvákat eltávolítottuk a fertőzött patkányok bélcsatornájából, a homoge-35 nizátumot centrifugáltuk, és a felülúszót elválasztottuk. Ezt sóoldattal 1 mg/ml protein koncentrációig hígítottuk, így nyertük a B oldatot. Charles River France/Fisons tenyésztésű 100— 40 130 g súlyú patkányokat intradermális injekcióval a jobb oldalukon 0,1 ml A szérummal oltottunk be. Az allergia 24 óra alatt kifejlődött, és a patkányokat ezután intravénásán 1 ml/100 g testsúly dózisban oltottuk be a B oldat (0,25 ml), Evans Blue 45 festékoldat (0,25 ml) és a vizsgálandó vegyület oldatának (0,5 ml, különböző százaléknyi aktív anyagot tartalmazó) elegyével. Az oldhatatlan vegyületeket külön intraperitoneális injekcióként adagoltuk, 5 perccel a B oldat és az Evans Blue festék int-50 ravénás adagolása előtt. Az aktív anyag mindegyik különböző százalékos dózisával 5—-5 patkányt oltottunk be. Minden vizsgálathoz 5 patkányt használtunk kontrollként. A vizsgálandó vegyületek dózisait úgy választottuk meg, hogy azok egy gát-55 lási sorozatot adjanak. A B oldat injektálása után 30 perccel a patkányokat megöltük, a bőrüket lehúztuk és kifordítottuk. Az allergiás reakció erősségét úgy határoz* 60 tuk meg, hogy összehasonlítottuk az érzékennyé tett állatoknak az Evans Blue által megfestett jellemző kék bőrelváltozásainak méretét a kontrollállatok elváltozásainak méretével. A fekélyek méretét 0-tól (nincs fekély, 100%-os gátlás) 4-ig 65 (nincs különbség a fekélyek méretében, azaz nincs 17
