165659. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kanamycin származékok előállítására
15 165659 16 A 3. példa szerinti nyersterméket feloldjuk 40 ml 50%-os, vizes dioxánban és a kismennyiségű oldhatatlan anyagot kiszűrjük. A szűrlethez 0,8 ml jégecetet és lg 10% palládiumot tartalmazó aktív szenet adunk, és az elegyet szobahőmérsékleten 24 órán át hidrogénezzük Parr-féle hidrogénező készülékben. Ezután a reakcióelegyet a palládiumkatalizátor eltávolítása céljából szűrjük, és a szűrletet vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot feloldjuk 30 ml vízben és CG—50 típusú ioncserélő gyantaoszlopon (NH^ típusú, 50cmXl,8cm méretű) kromatografáljuk. Az oszlopot 200 ml vízzel mossuk, majd 800 ml 0,1 n ammóniumhidroxid-oldattal, 500 ml 0,2 n ammőniumhidroxid-oldattal, végül 500 ml 0,5 n ammóniumhidroxid-oldattal eluáljuk. 10 ml térfogatú frakciókat gyűjtünk össze és a 146—154. frakciókból 552 mg (karbobenzoxi-kanamycin A-ra vonatkoztatva 22%) terméket kapunk, amelyet BB-K8 jelzéssel láttunk el. Olvadáspont: 187 C° (bomlás). Relatív hatékonyság B. subtilis-szal szemben (agar lemez) = 560 mcg/mg (standard: kanamycin A szabad bázis). 250 mg BB-K8 10 ml vízzel készített oldatát CG-50 típusú ioncserélő gyantaoszlopon (NHj típusú, 30 cmX0,9 cm méretű) kromatografáljuk. Az oszlopot 50 ml vízzel mossuk, majd 0,2 n ammóniumhidroxid-oldattal eluáljuk. 10 ml térfogatú frakciókat gyűjtünk össze. Az 50-63. frakciókat egyesítjük és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. 98. mg tiszta terméket kapunk, olvadáspont: 194 C° (bomlás), [a]^1 =+85° (c = 2, vízben). Relatív hatékonyság B. subtilis-szal szemben (agar lemez) = 960 mcg/mg (standard: kanamycin A szabad bázis). Elemzési eredmények C22 H43N 5 0, 3 X 2H2 C0 3 -ra vonatkoztatva: számított: C 40,62%, H 6,68%, N 9,87%, talált: C 40,21%, H 6,96%, 39,79%, 6,87%, N 9,37%, 9,49%. 5. példa N-(Benziloxikarboniloxi)-szukcinimid előállítása 23 g (0,2 mól) N-hidroxiszukcinimidet feloldunk 9g (0,22 mól) nátriumhidroxid 200 ml vízzel készített oldatában. Az oldathoz keverés közben és az elegy vízzel való hűtése közben cseppenként hozzáadunk 34 g (0,2 moll) karbobenzoxikloridot, majd az elegyet éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, hogy leválasszuk a karbobenzoxi-származékot, amelye^ szűréssel összegyűjtünk, majd vízzel mossuk és levegőn szárítjuk. Kitermelés: 41,1 g (82%). 10:1 arányú benzol-nhexán elegyből átkristályosítva színtelen prizmákat kapunk, amelyek 78-79 C°-on olvadnak. 6. példa ó'-Karbobenzoxi-kanamycin A előállítása 5 42,5 g (90 mól) szabad kanamycin A bázis 450 ml vízzel és 500 ml dimetilformamiddal készített oldatát 0C° alá hűtjük és erősen 10 keverjük. Az oldathoz körülbelül 2 óra alatt cseppenként hozzáadjuk 22,4 g (90 mmól) N-(benziloxikarboniloxi)-szukcinimid 500 ml dimetilformamiddal készített oldatát. Az elegyet éjszakán át keverjük —10—0C°-on, majd egy 15 napon át szobahőmérsékleten. A reakcióelegyet csökkentett nyomáson, körülbelül 50 C° alatti hőmérsékleten bepároljuk. Az olajszerű maradékot feloldjuk 500 ml víz és 500 ml butanol elegyében, az elegyből az oldhatatlan anyagot kiszűrjük és a 20 szűrletet két fázisra választjuk szét. A butanolos és vizes fázisokat kétszer 500 ml butanollal telített vízzel és kétszer 500. ml vízzel telített butanollal kezeljük, ellenáramú megosztáshoz hasonló technikával. A három vizes fázist egyesítjük 25 és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, így olajszerű maradékot kapunk, ennek egy része szobahőmérsékleten állni hagyva kristályosodik. A kristályokat magában foglaló maradékhoz körülbelül 100 ml metanolt adunk, amely feloldja az 30 olajszerű anyagot és elválasztja a kristályoktól. Körülbelül 300 ml etanol hozzáadása után. az elegyet éjszakán át szobahőmérsékleten tartjuk, kristályos masszát kapunk, amelyet szűréssel összegyűjtünk. Kitermelés 44 g. A termék kis-35 mennyiségű kanamycin A-t tartalmaz, amint ezt a vékonyrétegkromatográfiás adatok mutatják, ha oldószer-rendszerként n-propanol-piridin-ecetsav-víz (15:10:3:12) rendszert és előhívószerként ninhidrint alkalmazunk. 40 A nyersterméket feloldjuk 300 ml vízben és CG—50 típusú ioncserélő gyantaoszlopon (NHÍ típusú, 30 mm átmérőjű, 500 nű térfogatú) kro-45 matografáljuk. Az oszlopot átöblítjük 0,1 n ammóniumhidroxid-oldattal és az eluátumot 10 ml térfogatú frakciókként gyűjtjük össze. A kívánt terméket a 10—100. jelzésű kémcsövek tartalmazzák, míg a kanamycin A-t a lassabban 50 haladó frakciókból nyerjük ki és a termék izomerjeit a gyorsabban mozgó frakciók tartalmazzák. A 10-110. frakciókat egyesítjük és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. így 24,6 g (45%) színtelen 6'-karbobenzoxikanamycin 55 A-t (6'-kbz-kanamycin A) kapunk, amely 204C°-on kezd megolvadni és elszíneződni és 212C°-on gázfejlődés közben elbomlik. [<*]D =+106° (c = 2, vízben). Bár az egyik oldószer rendszerrel végezve a kromatográfiát, a végtermék mellett még két komponens található kis mennyiségben, a végterméket további tisztítás nélkül használtuk a 65 BB-K8 előállítására. 8
