165612. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikroorganizmusok termelésére
5 165612 6 glükózt, sem metanolt vagy formaldehidet. Ezeket a lombikokat azután beoltottuk Ps. extorquans NCIB No. 9399 tenyészettel, majd inkubáltuk őket. Minegyik esetben bekövetkezett a mikroorganizmusok fejlődése, ami azt mutatja, hogy a megmaradó formaldehid-tartalom nem volt elegendő a növekedés meggátlására. A táblázatban a keresztek száma arányos a növekedés mértékével. I. táblázat A lombik sorszáma A lombik tartalma 50 ml D2 + A mikroorganizmus növekedése A lombik sorszáma metanol formaldehid glükóz % % % 3 4 5 nap eltelte után 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 {kontroll) 22 (kontroll) 0,5 1.0 2.5 5.0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 0.1 0.5 1.0 2.5 5.0 0.1 0.5 1.0 2.5 5.0 0.1 0.5 1.0 2.5 5.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 hősterilizáit +++ + +++ +++ ++++ ++++ ++ +++ +++ ++++ +++++ 2. példa Formaldehid hatása Ps. extorquans folytonos tenyésztésére 40 Keverővel, adagolóval, hőmérővel és pH-mérővel ellátott, 71 űrtartalmú fermentorba beadagoltunk 45 0,58 súly/térf.% metanolt tartalmazó D2 közeget, amely be volt oltva Ps. extorquans NCIB No. 9399 48-órás rázott tenyészetével. Ezután a mikroorganizmust növekedni hagyjuk. Az edényben a hőmérsékletet 90 C°-on, míg a pH-t 6,4-es 50 értéken tartottuk, és a tenyészetet erősen kevertük és levegőztettük. A fermentáció előrehaladását a tenyészet mintáinak időközönkénti elemzésével követtük olyan módon, hogy minden egyes alkalommal meghatároztuk a közeg száraz 55 súlyra számított koncentrációját. Az eredményeket az 1. ábrán mutatjuk be. Az ábrán az ordinátán a száraz súlyra számított sejtkoncentrációt adjuk meg g/l egységekben, míg az abszcisszán az időt napokban. 60 Amikor a tenyészet elérkezett a stacioner állapothoz (vagyis optikai sűrűsége 4 óra alatt változatlan maradt), a folytonos tenyésztést kezdtük el olyan módon, hogy 250 ml/perc adagolási sebességgel 0,58% metanolt tartalmazó 65 D2 közeget adagoltunk az edénybe (az ábrán A pont). Az edényben a közeg teljes térfogatát 41 állandó értéken tartottuk olyan módon, hogy az edény aljától mért rögzített magasságban elhelyezett kifolyón keresztül közeget szivattyúztunk ki az edényből. 4 nap folytonos fermentálás után a közeget 0,58 súly/térf.% metanolt és 0,25 súly/térf.% formaldehidet tartalmazó D2 közegre cseréltük ki (az ábrán B pont). A fermentálást további 4 napon át folytattuk, majd a közeget 0,75 súly/térf.% formaldehidet metanol nélkül tartalmazó D2 közegre cseréltük ki (az ábrán C pont). Az 1. ábrából világosan kitűnik, hogy mikor 0,25 súly/térf.% formaldehidet adagoltunk a közeghez, a száraz súlyra számított sejtkoncentráció 1,6 g/l értékről 2,16 g/l értékre emelkedett, ami azt bizonyítja, hogy a tenyészet nemcsak, hogy tovább él a formaldehid kis koncentrációjának jelenlétében, hanem a formaldehidet szubsztrátumként képes a gyakorlatban felhasználni, és így a formaldehid koncentrációját az edényben a toxikusnál alacsonyabb szinten tartja. Amikor azonban nem volt metanol jelen a közegben, a tenyészet elpusztulása következett be, ami azt bizonyítja, hogy a mikroorganizmus csupán formaldehid segítségével nem tud növekedni. 3
