165546. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás egy dekapeptidamid előállítására

165546 7 '8 részletben összesen 1,87 ml (16,9 mmól) N-metil-morfolint. A reakcióelegyet éjszakán át állni hagyjuk, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot feloldjuk 150 rnl n-butanolban, és az oldatot vízzel, nátrium-ihidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, 1 n sósavval, majd ismét vízzel mossuk és vákuumban bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. így 9,46 g i(89,2%) védett tetrapeptidésztert kapunk. Op.: 160° (bomlik); R5

/ = 0,35— 0,45. 8. lépés: H-Trp-Ser-Tyr-Gly-OMe 9,46 g (14,37 mmól) védett tetrapeptidésztert (1. példa, 7. lépés) feloldunk 250 ml forró metanolban, majd az oldatot szobahőmérsékletre hűtjük, és csontszenes palládium katalizátor hozzáadása után hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, .metanollal alaposan kimossuk, a metanolos oldatokat egyesítjük és bepároljuk. A szilárd maradékot éterrel szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. Így 7,21 g (94%) tetrapeptidésztert kapunk. Op.: 162° (bomlik); R2

/ = 0,4— 0,5. 9. lépés: Z-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH 7,21 g {13,7 mmól) tetrapeptidésztert (1. példa, 8. lépés) és 8,6 g i(14 mmól) dikarbobenzoxi-hisztidin-2,4,5-triklórfenilésztert szuszpendálunk 14 ml dimetilformamidban, és oldódásig keverjük. Az oldatot éjszakán ét állni hagyjuk, majd etilacetát-éter ele-gyével hígítjuk. A kivált terméket szűrjük, etilacetát-éter eleggyel mossuk és szárítjuk. A kapott védett peptidésztert [Op.: 145° (bomlik); 9,9 g (76,0%); R4

/ = 0,6—0,7 (főtermék) és 0,1—0,2 {melléktermékként keletkező mono-ikarbobenzoxHpentapeptidészter)] szuszpendáljuk 300 ml metanolban, majd 35 ml 1 n nátrium-hidroxid hozzáadása után 4 órán át keverjük. Az oldatot 1 n sósavval semlegesítjük, vákuumban szárazra pároljuk, éterrel eldörzsöljük, szűrjük, vízzel, majd éterrel mossuk és szárítjuk. A nyers terméket (8 g) 100 ml 96%-os etanollal forraljuk, a szuszpenziót hűtjük, szűrjük, etanollal és éterrel mossuk. így 7,27 g (88,3%) (tetrapeptidészterre számolva 67,1%) karbobenzoxi-pentapeptidet kapunk. Op.: 195° (bomlik); R1

/ = 0,55--0,65. 10. lépés: H-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH 6,0 g {7,67 mmól) karbobenzoxi-vegyületet (1. példa, 9. lépés) feloldunk 100 ml dimetilformamidban, hozzáadunk 100 ml vizet és csontszenes palládium katalizátort, majd hidrogénezzük. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük és az oldatot ibetöményítjük. A kapott olajos maradékot acetonnal eldörzsöljük, a kivált anyagot szűrjük, acetonnal mossuk és szárítjuk. 4,37 g (88%) pentapeptidet kapunk. Op.: 151° (bomlik); R1

/ = 0,30—0,35. 11. lépés: Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH 0,9 g {1,388 mmól) pentapeptidet (1. példa,. 10. lépés) és 0,43 g {1,392 mmól) piroglutamin-5 sav-2,4,5-triklórfenilésztert feloldunk 4 ml dimetilformamidban, hozzáadunk 0,195 ml (1,388 mmól) trietilamint, és éjszakán át keverjük. A reakcióelegyet 400 ml acetonba csepegtetjük, a kivált csapadékot szűrjük, acetonnal mossuk 10 és szárítjuk. Így 0,95 g (90,2%) hexapeptidel. kapunk. Op.: 158° (bomlik); R1

/= 0,3—0,4; R6

/ = 0,5—0,6. 12. lépés: Pyr-His-Trp-nSer-Tyr-Gly-Leu-15 -Arg(N02

)-Pro^Gly-NH

2 0,95 g {1,252 mmól) hexapeptidet (1. példa, 11. lépés) és 1,13 g (1,502 mmól) tetrapeptidamid-pentaklórfenolátot {1. példa, 4. lépés) fel-20 oldunk 4 ml dimetilformamidban, és hozzáadjuk 1,51 g (1,502 mmól) diciklohexil-karbodiimid — {1) és pentaklórfenol — (3) komplex vegyületét. A reakcióelegyet 1 órán át 0°-on, éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, rnajd 25 a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük és dimetilformamiddal mossuk. A dimetilformamidos oldatokat egyesítjük, és keverés közben 500 ml acetonba csepegtetjük. A kivált csapadékot szűrjük, acetonnal mossuk és szárítjuk. Így 1,3 30 g (84,7%) nitro-dekapeptidamidot kapunk. Op.: 141° (bomlik); R1

/= 0,57—0,68; R

7

/ = 0,55— 0,65; R8

/ = 0,53—0,63. 13. lépés: Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-35

-Pro-Gly-NH2

•

2AcOH 1,28 g {1,043 mmól) dekapeptidamid-származékot (1. példa, 12. lépés) feloldunk 260 ml 80%-os ecetsavban, és csontszenes palládium 40 katalizátor mellett hidrogénezzük. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az ecetsavas oldathoz körülbelül 1 ml merkapto-etanolt adunk és vákuumban bepároljuk. A párlási maradékot körülbelül 5 ml vízben feloldjuk, és keverés 4 közben 500 ml acetonba csepegtetjük. A kivált csapadékot szűrjük, acetonnal mossuk és szárítjuk. Így 1,15 g (80%) - dekapeptidamidot kapunk. R1

/ = 0,02J0,012; R

8

/ = 0,35—0,45; EHÍS

6,5 = 0,9;

[cc]20

D

= 49° {c = l, 1%-os ecet-50 savban). Aminosav analízis: (savas hidrolízis után): Ser 1,03 (1), Glu 1,04 (1), Pro 1,02 (1), Gly 2,08 (2), Leu 1,0 (1), Tyr 0,98 (1), His 0,95 (1), Arg 0,96 5g (1), NH

3

1,18 {1), 2. példa: 1. lépés: BOC-Arg(N02

)-Pro-ONB 60 6,38 g (20 mmól) terc^butiloxikarbonil-mtro-arginint feloldunk 10 ml olyan dimetilformamidban, mely 2,22 ml {20 mmól) N-metil-morfolint is tartalmaz. Az oldatot —20°-ra hűtjük, és hozzácsepegtetünk 2,4 ml (20 mmól) pivalil-65 -kloridot. 20 ml dimetilformamidban szuszpen-4