165526. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A-4696-jelű új antibiotikum előállítására

165526 15 16 kikristályosodik az oldatból. A kristályokat szűréssel elkülönítjük és szárítjuk. Közelítőleg 9 g kristályos A—4696-hidroklorid keletkezik. 2. példa: Az A-—4696 jelű antibiotikum tisztítása savas alumíniumoxiddal Az 1. példa D) pontja szerinti eljárással előállított nyers A—4696 jelű antibiotikum 2,3 gját 20 ml vizes metanolban oldjuk, és az oldattot 2X4 cm méretű, savval mosott alumíniumoxid (Alcoa) oszlopon engedjük át. Az oszlopot ezután azonnal metanollal mossuk. A hatóanyagot a savas alumíniumoxid oszlopról 50%os vizes metanollal eluáljuk. Eluáláskor mindegyik frakció antimikrobiális aktivitását meghatározzuk. Az aktív eluátumokat egyesítjük, közelítőleg 100 ml-re töményítjük, majd acetont adunk hozzá, amikor az ÍA—4696 antibiotikum kicsapódik. A csapadékot szűréssel elkülönítjük, csökkentett nyomáson szárítjuk, és így kb. 930 mg tiszta, .kristályos A—4696 antibiotikumot kapunk. A fenti tisztítási lépésben használt savas alumíniumoxidot a következő eljárás szerint állítottuk elő: Alcoa F—20 jelű aktív alumíniumoxidot vízzel mosunk, a szuszpenzió pH-ját kénsavval 3,0-ra állítjuk, majd 6 órán át keverjük, miközben pH-ját 3,0-as értéken tartjuk. Szűrés után az alumíniumoxidot 50%-os vizes metanollal mossuk, és égetőkemencében 100 C° hőmérsékleten szárítjuk. 3. példa: Az A—4696 antibiotikum tisztítása pikrátsójának előállításával, és ennek sósavas sóvá történő átalakításával Az 1. példa D) pontja szerinti eljárással előállított nyers A—4696 antibiotikum 500 mg-ját 25 ml vízben oldjuk és keverés közben 25 ml telített vizes pikrinsav oldatot adunk hozzá. Az elegyet egy éjszakán át 5 C° hőmérsékleten állni hagyjuk, amikor csapadék válik ki az oldatból. Ezt a csapadékot centrifugálással elkülönítjük, majd megszárítjuk. Ezután 25 ml .metanolban oldjuk, az oldat pH-ját sósavval 1,5-re állítjuk és 500 ml dietilétert adunk hozzá, amikor az A—46964űdroklorid kicsapódik az oldatból. Ezt centrifugálással elkülönítjük, dietiléterrel mossuk, csökkentett nyomáson megszárítjuk. Ily módon közelítőleg 305 mg A—4696--hidrokloridot kapunk, fehér kristályos termék alakjában. 4. példa: Az A—4696-szulfát előállítása Az 1. példa E) pontja szerinti eljárással készített A—4696-hidroklorid 2 g-ját 300 ml vízben oldjuk. Az oldat pH-ját 5 N nátriumhidroxiddal 7,5-re állítjuk és 30 g Darco G—60 aktívszenet adunk hozzá. A szuszpenziót 30 peroen át keverjük, ismert szűrési segédanyag hozzáadása után szűrjük. A szűrési maradékot 300 ml vízzel, majd ugyancsak 300 ml 0,05 N kénsavval mossuk. 500 ml 70%. 0,05 N kénsavat és 30% acetont tartalmazó eleggyel a szűrési maradékról eluáljuk az aktív anyagot oly módon, hogy 30 percen át történő keverés után szűréssel eltávolítjuk a szenet az oldatból. A szürletet 10 ml térfogatúra pároljuk be, majd 20 ml metanolt adunk a koncentrátumhoz. Az oldathoz ezután 600 ml acetont adunk, amikor kicsapódik az oldatból az A—4696 antibiotikum .kénsavas sója. A csapadékot szűréssel elkülönítjük, acetonnal mossuk, majd csökkentett nyomáson megszárítjuk. Így 862 mg A—4696 kénsavas sót kapunk fehér kristályok alakjában. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás az A—4696 jelű antibiotikum és gyógyászatilag alkalmazható sóinak előállítására, azzal jellemezve, hogy az előállítást Actinoplanes sp. ATCC 23 342 jelű organizmussal, felhasználható szén- és nitrogénforrásokat, továbbá szervetlen sókat tartalmazó táptalajon, sülylyesztett, aerob fermentációs körülmények között tenyésztve végezzük, majd az antibiotikumot kinyerjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a keletkezett antibiotikumot adszorbensen adszorbeáltatjuk, savas oldószerrel eluáljuk, az antibiotikumot savas kromatográfiás adszorbensen adszorbeáltatjuk, majd a megfelelő oldószerrel eluáljuk. 3. A 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, az A—4696 antibiotikus sósavas vagy kénsavas sójának előállítására, azzal jellemezve, hogy eluensként sósavat, illetve kénsavat tartalmazó oldószert használunk. 4. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás továbbfejlesztése periodontális megbetegedések kialakulását és fogromlást meggátló készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy az A—4696 antibiotikumot vagy valamely gyógyászatilag alkalmazható sóját —előnyösen orális — higiéniai készítmények előállításánál használatos hordozó-, kötő-, ízesítőanyagokkal, stb. keverve krém, gél, por, szájvíz, stb. alakra készítjük ki. 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 8