165526. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A-4696-jelű új antibiotikum előállítására
3 165526 4 pontja 220 C° felett van. Vízben oldódik, metanolban, aeetonban, éterben, kloroformban, piridin'ben, benzolban, alifás szénhidrogénekben és hasonló oldószerekben nem oldódik. Kb. 27 C°-ig 1—10 pH-jú oldatában igen stabil. Az A—4896-hidroklorid víziben vagy dimetilformamid : víz 2 : 1 arányú elegyben történő potenciometrikus titrálásakor pH 6—13 között közelítőleg lineáris, 0,14 meredekségű, csökkenő tendenciájú egyenest ad. Több mikroanalízis eredményeinek átlaga szerint az A—4696-hidroklorid közelítőleg a következő százalékos elemösszetételű: C: 51,33; H: 5,79; N: 5,46; O: 30,-96 és Cl: 6,72%. Molekulasúlya gőznyomás-ozmotikus módszerrel mérve: 1158. Az A—46964iidroklorid fajlagos forgatása (a)D 25 C°-on —42,3° (c== 1; H 2 0). Az A—4696-hidroklorid ultraibolya adszorpciós spektrumában, savas és semleges oldatban mérve, 276 m^-nál maximum látszik; extinkciós koefficiens Ej cm 45. Bázikus oldatában 300 m^-nál mutat abszorpciós maximumot; extinkciós koefficiens Ej^m 65. Az A—4696-Jiidroklorid infravörös abszorpciós spektrumát az I. ábra mutatja (ásványi olajban). A megkülönböztethető abszorpciós maximumok a 2,0 és 15,0 fi közötti méréstartományban a következők: 3,0; 5,8; 5,9; 6,03; 6,15; 6,28; 6,63; 6,85; 7,27; 7,75; 8,1; 8,25; 8,9; 9,4; 9,9; 10,1 fi. Az A—4696^hid;roklorid R/-értékekkel jellemzett kromatográfiás képét az I. táblázatban tüntetjük fel. A kísérleteket Whatman-típusú (1) szűrőpapírral és a táblázatban megadott oldószerrendszerekkel végeztük. Az antibiotikum elhelyezkedését a kromatogramon bioautográfiás úton, Bacillus subtilis tesztorganizmussal szemben mérve határoztuk meg. . I. táblázat Az A—4696-HC1 papírkromatográfiás vizsgálata árrendszer R/-érték* 1 0,88 2 0,72 3 0,80 4 0,59 5 0,35 6 0,77 7 0,80 8 0,74 9 0,87 10 0,59 11 0,77 * Az R/-érték az antibiotikum, illetve az oldószer vonalának a starthelytől számított elmozdulása távolságának hányadosát jelenti. Oldószerrendszerek: I. ButanoHal telített víziben oldott 1% p-toluolszulfonsav. 5 2. Metilizobutil-ketonnal telített vízben oldott 1% p-toluolszulfonsav. 3. Metilizobutil-ketonnal telített vízben oldott 1% p-toluolszulfonsav és 1% piperidin. 4. Víz : metanol ; aceton elegy (12 : 3 :1). Az 10 elegy pH-ját NH4 OH-dal 10,'5-re állítjuk, majd HgPO^val 7,5-re csökkentjük. 5. Metanol : 0,1 N HCl (3 :1). 6. 1% metilizobutiHseton és 0,5% NH4OH vizes oldata. 15 7. 7% nátriumklorid és 2,i5% metilizobutil-keton vizes oldata. 8. 10% propanol vizes elegye. 9. Butanol : etanol : víz (150 : 15 : 13,5). 10. Propanol : ecetsav : piridin : víz (15 : 3 : 20 : 10 : 12). II. Víz : etanol : ecetsav (70 : i24 : 6). Az A—4696 jelű antibiotikum gyógyászatilag hatékony sóit ásványi savakkal — ilyen például „ a sósav, hidrogénbromid, kénsav, foszforsav és hasonlók — és szerves savakkal — ilyen például a citromsav, borkősav, maleinsav, p-toluolszulfonsav, szalicilsav, fumársav, ecetsav, propionsav — és hasonlókkal állítjuk elő. Az antibioti-30 kum ilyen savakkal képzett sóit úgy állítjuk elő, hogy az antibiotikum-bázis oldatát a megfelelő savval megsavanyítjuk, és az így keletkezett sót az oldat térfogatára számított tízszeres mennyiségű acetonnal kicsapjuk. Bizoo- nyos esetekben az antibiotikum sóit ioncserélő gyantán, ioncserével is előállíthatjuk. Más, az antibiotikumok sóinak előállítására általánosan használt módszerek szintén felhasználhatók. A találmány szerinti eljárással előállított új 40 antibiotikum gátolja számos baktérium, köztük humánpatogének, állati és növényi kórokozók növekedését is. A II. táblázatban számszerűen megadjuk azokat az A—4696-hidroklorid koncentráció-értékeket, amelyeknél a felsorolt or-45 ganizmusok növekedése gátolt. A növekedésgátló koncentrációkat agárral vagy húslevessel történő hígítási módszerrel határoztuk meg, és a legalacsonyabb növekedésgátló hatású koncentrációt fvg/ml-ben adjuk meg. A II. táblázatban 50 „ah" az agárral, „Ih" a húslevessel történt hígítást jelöli. Áz agaros módszer esetén a tesztorganizmust különböző A—4696-hidroklorid koncentrációjú agárra rétegezzük, vagy oltjuk. A Petri-csészé-55 ket 37 C°-on, 48 órán át inku'báljuk, és a legalacsonyabb gátló koncentrációnak azt az értéket vesszük, ahol a tesztorganizmus növekedése még gátolt. 60 A húsleves-hígításos módszernél, a különböző A—4696-hidroklorid koncentrációjú táptalajokat beoltjuk a tesztorganizmussal, majd .37 C°-on, 24 órán át inkubáljuk. A legalacsonyabb gátló koncentrációt az az érték jelenti, ahol növeke-65 dés már nem figyelhető meg. 2
