165408. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-helyettesített 7béta-(D-5-amino-5-karboxi-vaIeramido)-7-metoxi-cef-3-em-4-karbonsav-származékok előállítására

165408 43 7. példa A 7ß~(D-5-amino-5-karboxi-valeramido)-3-..~(a-metoxi-p-szulfoxi-cinnamoiloximetil)-7-m,etoxi~cej-3-em-4-karbonsav elkülönítése a BIO A antibiotikumból Az 5. példa d) lépésében kapott 810A antibiotikum-elegyből, amely 7j5-(D~5-amino-5~karboxi-valeramido)-3~(aHmetoxi-p-szulfoxi-cinnamoiloximetil)~7-metoxi-eef-3-em-4-karbonsavat (Ic) és 7^-(D-5-amino-5^karboxi-valeramido)-3-(a-metoxi-p-hidroxi-cinnamoiloxi<metil)-7-metoxi-cef-3-am~4-karbonsavat tartalmaz, 5,0 g menynyíséget 20 ml vizes 20%-os acetonoldatban oldunk, és az oldat pH-értékét 4,0-ra állítjuk. Ezt az oldatot egy 5 cm átmérőjű, 100 cm magas Amberlite XAD—2 ágyra (20%-os vizes acetonoldatban) visszük, majd az ágyon keresztül vizes 20%-os acetonoldatot vezetünk óránkénti 880 ml áramlási sebességgel, és az eluátumból önműködő készülékkel 20 ml térfogatú frakciókat fogunk fel. Minden harmadik frakciót korongmódszerrel vizsgálunk biológiai aktivitás szempontjából, Proteus vulgaris MB—838 törzzsel szemben, 0,6 cm átmérőjű korongok alkalmazásával. A vizsgált frakciók a következő táblázatban megadott átmérőjű gátlási zónákat mutatják: Frakció Zóna Frakció Zóna Frakció átm. átm. mm mm 1—41. 44. 47. 50. 53. 56. 59. 62. 65. 68. 7,1. 74. 77. 80. * 83. 86. 89. 92. 96. 98. 101. 104. 107. 110. 113. 116. 119. 122. 125. 128. 0 12 22 25 29 31 35 30 28 27 25 24 21 20 19 16 14 13 13 13 13 14 13 13 11 10 9 8 8 8 i3a. 134. 137. 140. 143. 146. 149. 152. 155. 158. 161. 164. 167. 170. 173. 176. 179. 182. 185. 188. 191. 194. 197. 200. 203. 206. 209. 212. 215. 218. 0 0 0 8 11 13 13 15 15 16 17 18 17 18 20 21 21 21 21 22 2o 23 2S 22 24 24 24 24 24 19 221. 224. . 227. 230. 233. 236. 239. 242. 245. 248. 251. 254. 257. 260. 263. 266. 269. 272. 275. 278. 2,81. 284. 287. 290. 293. 296. 299. 302. 330. Zóna átm. mm 18 18 18 17 17 15 15 15 15 14 14 14 13 13 12 12 12 11 11 10 10 9 3 0 0 0 0 0 50 A fenti frakciók közül a 44—90. frakciót egyesítjük, az acetont vákuumban elpárologtatjuk, és a visszamaradó vizes koncentrátumot fagyasztva szárítjuk. Ily módon maradékként 3,3 5 g nyers 7ß-(D-5-amino-5~karboxi-valeramido)-3-^(aimetoxi-p-,szulfóxi-cinnamoiloximetil)-7-ímetoxi-cef-3-eim-4-karbonsavat (Ic) kapunk. A 150—225. frakciót ugyancsak egyesítjük; a fent leírthoz hasonló feldolgozás útján 700 mg 10 7/S-'(D-5-amino-5-karboxi-valeramido)-3-(a-metoxi-p-hidroxi-cinnamoiloximetil)-7-metoxi-cef-3-em-4-karbonsavat kapunk. A fenti példában leírt frakcionálási műveletet a kiindulóanyag ugyanilyen mennyiségével meg-15 ismételjük; ebben a műveletben 3,1 g 7/?-(D-5--amino-5-karboxi-valeramido)-3-(a-metoxi-p-szulfoxi-cinnamoiloximetil)~7-imetoxi-cef-3-em-4-karbonsavat (Ic) és 400 mg 7/?-(D-5-amino-5-karboxi-vale;ramido)-3-{«-metoxi~p-hidroxi-20 -cinnamoiloximetil)-7-metoxi-cef-3-em-4-karbonsavat kapunk. A 7|ö-(D-5-amino-5-karboxi-valeramido)-3-(a-metoxi-'p-szulfoxi-cinRa:moiloximetil)-7-metoxi-cef-3-em-4-karbonsav (Ic) fenti módon kapott 25 két adagját egyesítjük, és az így kapott 6,4 g terméket egy 5 cm átmérőjű és 100 cm magas Amberlite XAD—2 gyantaágyra (5% metanolt tartalmazó vízben) visszük. Az ágyon keresztül azután 5% metanolt tartalmazó vizes oldatot, ve-30 zetünk óránként 880 ml áramlási sebességgel, miközben önműködő készülékkel 20 ml térfogatú frakciókat fogunk fel. 287 frakciót fogunk fel ilyen módon; ezekből minden negyediket biológiai értékmérésnek vetünk alá, a szo-35 kásos korongmódszerrel, Proteus vulgaris MB— 838 törzzsel szemben, 0,6 cm átmérőjű korongok alkalmazásával. Az 1—50. frakciót nem vizsgáljuk ; a további frakciókkal kapott gátlási zónák átmérőjét a következő táblázatban adjuk meg: 40 45 50 Frakció Zóna átm. mm. Frakció 55 60 65 51. 55. 59. 63. 67. 71. 75. 79. 83. 87. 91. 95. 99. 103. 107. 111. 23 26 23 18 12 0 0 0 7 9 13 19 21 22 22 21 115. 119. 123. 127. 131. 1,55. 139. 143. 147. 151. 155. 159. 163. 167. 171, 287. Zóna átm. mm ••'•'- 20 20 19 18 19 16 17 15 16 15 13 11 9, ' 0 0 0 A fenti frakciók közül a 95—159. frakciót egyesítjük, a metanolt vákuumban elpárologtatjuk, és a visszamaradó vizes koncentrátumot fagyasztva szárítjuk. Ily módon 700 mg 7/?-(D-5-