165408. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-helyettesített 7béta-(D-5-amino-5-karboxi-vaIeramido)-7-metoxi-cef-3-em-4-karbonsav-származékok előállítására
165408 25 26 „NZ Amine" (enzimmel lebontott VII. tápközeg: kazein) dextróz 10,0 10,0 g g Inokulum Termelés NaCl 5,0 g L-aszparagin 5,0 g 5,0 g desztillált víz 1000,0 ml 5 L-hisztidin 4,0 g 4,0 g pH-érték nátriumhidroxiddal 7,2-re állítva. DL-fenilalanin — 2,0 g mononátrium-glutamát — 1,5 g III. tápközeg: NaCl 5,0 g 5,0 g 10 K2HPO4 2,0 g 2,0 gdextróz 10,0 g CaCl2 . 2H 2 0 0,4 g 0,4 g . aszparagin 1,0 f? MnSQ4 . H 2 0 0,1 0 0,1 g K2 HP0 4 0,1 g FeS04 . 7H2 0 0,1 g 0,1 g MgSO/j. 7H2 0 0,5 g ZnS04 . 7H2 0 0,05 g 0,05 g élesztőkivonat 0,5 g 15 MgS04 . 7H 2 0 1,0 g 1,0 g nyomelemek 2. sz. elegy 10,0 ml glicerin 20,0 g 20,0 g desztillált víz 1000,0 ml szacharóz 2,5 g 2,5 g pH-érték nátriumhidroxiddal 7,2-re állítva. desztillált víz 1000,0 ml 1000,0 ml A 2. sz. nyomelemelegy összetétele: pH (nátriumhidroxiddal FeS04 . 7H2 0 1,0 g 20 beállítva): 7,0 7,1 MnS04 . H 2 0 1,0 g CuCl2 . 2H 2 0 25.0 mg CaCU 100,0 mg VIII. tápközeg: H:) BÖ n 56.0 mg (NHÍ)GM07024 - 4H2 0 19,0 mg 25 húskivonat 0,3% ZnSCv,. 7H2 0 20-0,0 mg NaCl 0,5% desztillált víz 1000,0 ml „NZ amine" dextróz pH 1 "„ 1 % 7.0 IV. tápközeg: 30 A fermentációt kb. 20 "C és 37' 'C közötti hő-V8 gyümölcslé (8-féle vegyes mérsékleten folytatjuk le; optimális eredmények gyümölcsből) 100,0 ml elérése érdekében előnyös fermentációt 22—30 szójaliszt (Staley 4S) 20,0 g °C-on lefolytatni. Az MA—£837 Streptomyces flPYÍTn7 2,0 35 griseus kultúra fejlődése és a 810A antibiotikum UCA Li. \j£i 2,0 g termelése szempontjából célszerű, hogy a tápagar 25,0 g közeg pH-értékét kb. 5,5 és 8,0 között tartsuk. desztillált víz 1000ml-re A 810A antibiotikum termelésére a kisméretpH = 7,9—8,0. 40 ben lefolytatott fermentációt célszerűen úgy végezzük, hogy az e célra alkalmas tápközeget beoltjuk az antibiotikumot termelő kultúrával és V. tápközeg: a fermentációt kb. 24 °C és 28' 'C közötti hőmér-10,0 10,0 2,0 0,05 1000,0 g g ml élesztő-autolizátum (Ardamine) glükóz foszfát-puffer MgSG4 . 7H 2 0 desztillált víz pH nátriumhidroxiddal 6,5-re beállítva A foszfát-pufferoldat összetétele: KH2 P0 4 Na2 HP0 4 desztillált víz VI. tápközeg: kukoricalekvár (nedves anyagra számítva) dextróz NaCl MgSCv,. 7H2 0 poliglikol 2000 (minden lombikhoz külön hozzáadva) desztillált víz 1000,0 ml pH-érték nátriumhidroxiddal 7,0-ra állítva. 45 91,0 g 95,0 g 1000.0 ml 40,0 g 20,0 g 2,5 g 0,5 g 0,25 tf% sékleten, állandó hőmérséklet betartásával, rázóasztalon huzamosabb ideig, pl. néhány napig folytatjuk. Az inkubálási időszak végeztével a micéliumot eltávolítjuk, és az elkülönített fermentációs lében meghatározzuk az antibiotikum-tartalmat. A gyakorlatban ezt a fermentációt sterilizált 50 lombikban folytatjuk le egy, két, három vagy négy fokozatban tenyésztett inokulummal. Az inokulum-kultúra tenyésztésére tápközegként bármely ilyen célra alkalmas, szénforrást és nitrogénforrást tartalmazó tápközeg, pl. a fen-55 tebb ismertetett I—VIII. tápközegek bármelyike felhasználható. Az inokulum tenyésztése során a lombikot 28 °C körüli állandó hőmérsékleten tartott kamrában 1—3 napig rázatjuk, majd az így kifejlődött kultúrát vagy az inokulum-te-60 nyésztés második fokozatába, vagy pedig az antibiotikum termelésére szolgáló tápközegbe oltjuk át. Az mokulum-tenyésztés további fokozataiban — amennyiben ilyeneket alkalmazunk — a kultúra tenyésztése lényegileg ugyanilyen 65 módon történik, vagyis az előző fokozatból ka-
