165340. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A 2315 új antibiotikum előállítására
165340 1. táblázat Oldószerelegy Rf-érték Metil-etil-keton:benzol:víz = 1:5:1 0,19 (felső fázis) Vízzel telített butanol 0,91 Vízzel telített butanol + 2% p-toluol-szulfonsav 0,91 Metil-izóbutil-keton, vízzel telítve 0,56 Vízzel telített metil-izobutil-keton + 2% p-toluolszulfonsav 0,60 Víz:metanol:aceton = 12:3:1, az elegy pH-ját NH4 OF-dal 10,5-re állítjuk be, majd foszforsawal 7,5-re csökkentjük 0,83 1% metil-izobutil-ketont és 0,5% ammóniumhidroxidot tartalmazó víz 0,75 Literenként 17,4 g K2 HP0 4 -ot és 30 ml etanolt tartalmazó víz 0,72 literenként 70 g nátriumkloridot és 25 ml metil-etil-ketont tartalmazó víz 0,65 Propanol:víz = 1:9 0,84 Butanol:etanol:víz = 27:30:300 0,90 10 15 20 25 Az A 2315 az aminosav-analízis adatai szerint nagymennyiségű alanint tartalmaz. A vegyület két hidroxilcsoportot tartalmaz, a szokásos reakciókkal, például piridinben ecetsavanhidriddel acetilezhető. Az észter-származékok szintén rendelkeznek antibiotikus hatással. A megfigyelt fizikai adatok és szerkezet megismerésére vonatkozó kísérletek alapján az A 2315 jelű antibiotikum közelítő szerkezetét az I képleten adjuk meg. Ez a szerkezet csak a valószínű szerkezet, érthető módon, csak a szerkezetvizsgálat munkahipotézisének eredménye. A találmány szerinti eljárással előállított, A 2315-nek elnevezett antibiotikum bizonyos mikroorganizmusok növekedését gátolja. A növekedést gátló koncentrációkat különböző vizsgálati módszereket használva határozzuk meg. Az érzékenységet elsősorban agar-lemezeken határozzuk meg. A tesztorganizmusként használt mikroorganizmussal oltott táptalajra 6 ml átmérőjű, 0,02 ml folyadékot felszívó szűrőpapír-korongokat helyezünk. A korongokat log 2-szörösen hígított, antibiotikumot tartalmazó oldatokba mártjuk. A korong az oldat koncentrációjából adódó anyagmennyiség 1/50-ed részét tartalmazza, azaz egy 1500 gamma/ml-ed töménységű oldatban mártott szűrőpapír-korongon 30 gamma mennyiségű antibiotikum van. A fenti kísérletekből kapott eredményeket a 2. táblázatban adjuk meg. 30 50 55 2. táblázat Az A 2315 jelű antibiotikum agar-diffúzióval meghatározott növekedésgátló hatása Tesztorganizmus Legkisebb növekedésgátló koncentráció (gamma/korong) Staphylococcus aureus 3055* 0,025 Staphylococcus aureus 3130*** 0,2 Staphylococcus aureus 3074** 0,4 Mycobacterium avium 3,13 Streptococcus pyogenes 0,012 Bacilus subtilis 50 Barcina lutea 0,008 Proteus sp. 100 Escherichia coli 12,5 Salmonella typhimuriurn 12,5 Shigella flexneri 1,56 Klebsiella pneumoniae 12,5 Klebsiella pneumoniae 50,0 Candida albicans 100,0 Saccharomyces pastorianus >100,0 Trichophyton mentagrophytes >100,0 Fusarium moniliforme >100,0 Neurospora sp. > 100,0 * benzilpenicillin-érzékeny ** benzilpenicillin-rezisztens *** benzilpenicillin-rezisztens, meticillin-rezisztens Az A 2315 jelű antibiotikum, a kísérleti állatok 35 fertőzéses vizsgálata előtt végzett, folyékony táptalajjal foganatosított hígításos érzékenységi vizsgálatának eredményeit a 3. táblázatban adjuk meg. 40 3. táblázat a Az A 2315 higitásos módszerrel meghatározott növekedésgátló koncentrációi 45 Tesztorganizmus Legkisebb növekedésgátló koncentráció (gamma/ml) Staphylococcus aureus 3055 * 3,13 Streptococcus pyogenes C 203* 0,4 Diplococcus pneumoniae Park I 25,0 * benzilpenicillin-erzekeny 60 A találmány szerinti eljárással előállított A 2315 jelű aktibiotikum egereknek szubkután adagolva in vivo hatásos kísérleti bakteriális fertőzésekkel szemben. Ha egyértelműen fertőzött egereknek kétszer A 2315-öt adunk, a következő EDS0 -értékeket [az a 2
