165175. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tiszta, krisztályos penicillin-aciláz előállítására

165175 11 ra visszük. Lineáris gradienssel eluálunk; a penicillin-acilázt a gradiens végső szakasza felé kapjuk. Az eluátum 21 000 E enzimet (az elméleti hozam 73%-a) tartalmaz, 11,2 E/mg fajlagos aktivitással. *> Az így kapott oldat 6000 E enzimtartaloráhak megfelelő részét szilárd ammóniumszulfát hozzáadása útján 45%-ig telítjük ammóniumszulfáttal. Körülbelül két hét alatt nagyméretű kristályok alakulnak ki az edény falán. További két- io heti állás után (szobahőmérsékleten) a képződött kristályokat centrifugálással elkülönítjük. A kapott termék egy meghatározott hányadrészét aktivitásmeghatározás céljából vízben oldjuk. 4260 E enzimet (az elméleti hozam 71%-a) ka- 15 punk, 13,1 E/mg fajlagos aktivitással 6. példa ••• Egy bentoniteluátumot, amelyet a 4. példában leírt módon kaptunk, és amely 4100 E enzimet 20 tartalmaz 2,0 E/mg fajlagos aktivitással, 0,05 mólos, 5,0 pH-értékű nátriumacetát-oldattal szemben diajizálunkj majd a dializált oldatot egy 2,5X25 cm méretű, Na+-fázisú Lewatit SP— 100 ioncserélővel töltött oszlopra visszük. Az 25 eluálást lineáris gradienssel, 0,05—0,5 mólos, 5,0 pH-értékű nátriumacetát-oldattal végezzük. Az aktív frakciókból 2020 E enzimet (az elméleti hozam 56%-a) kapunk, 6,6 E/mg fajlagos aktivitással. 30 A fenti módon kapott enzimoldatot nátriumhidroxid-oldattal 6,5 pH-értékre állítjuk, majd szilárd ammóniumszulfát hozzáadása útján 48%ig telítjük. Így a tiszta enzim kikristályosodik; 1250 E enzimet (az elméleti hozam 62%-a) ka- 35 punk, I2jl E/mg fajlagos aktivitással. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás tiszta, kristályos penicillin-acíláz előállítására Escherichia coH sejtekből, célszerű- 40 4 lap 12 en E. coli ATCC 11105 vagy ATCC 21 728 sejtekből készített, a penicillin-aciláz mellett az E. coli sejtek elroncsolt részeit is tartalmazó, nyers kivonatból, azzal jellemezve, hogy a nyers kivonatot 3,5 és 5,5 közötti, előnyösen 5,0 pH-értékre állítjuk, a kivonatot centrifugáljuk, a szupernatánsként kapott tiszta penicillin-aciláz-oldatot valamely alumíniumszilikát-adszorbenssel, előnyösen bentonittal kezeljük, az adszorbátumot elkülönítjük és eluáljuk, az így kapott tiszta, feldúsított penicillin-aciláz-oldatot makropórusos ioncserélőkön kromatografáljuk, és az így kapott, részlegesen tisztított penicillin-aciláz-ol-» datból a tiszta enzimet — adott esetben vízben oldott — ammóniumszulfát hozzáadása útján kikristályosítjuk (Elsőbbsége: 1972. október 13). 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy ioncse^ rélőként valamely anioncserélőt, különösen bázikus csoportokkal szubsztituált cellulózszármazékokat vagy hálós kötésű dextránokat alkalmazunk. (Elsőbbsége: 1972. április 13.) 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosít tási módja, azzal jel le m e z v e , hogy ioncserélőként valamely makropórusos kationcserélőt, különösen savas csoportokkal szubsztituált cellulózszármazékokat, hálós kötésű dextránokat vagy poliakrilamid-géleket alkalmazunk. (Elsőbbsége: 1971. október 14.). 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy ioncserélőként egy anioncserélőt, különösen bázikus csoportokkal szubsztituált cellulózszármazékokat vagy hálós kötésű dextránokat és agy makropórusos kationcserélőt, különösen savas csoportokkal szubsztituált cellulózszármazékokat, hálós kötésű dextránokat vagy poliakrilamid-géleket alkalmazunk egymást követően, tetszőleges sorrendben. (Elsőbbsége: 1972. április 13.) A iJöacláeért Hitel: a Kiösöaaítasáigi és Jogi Könyvkiadó ägaaga»61a. Győr-Sopron megyei NyamöaváJJalsrt, Gyűr 75.14*8