165141. lajstromszámú szabadalom • Eljárás részecskealkotó fehérjék eltávolítására vérszérumból
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1972. III. 24. Amerikai egyesült államokbeli elsőbbsége: 1971. III. 25. (128, 152) Közzététel napja: 1973. XII. 28. Megjelent: 1976. II. 29. (SU-727) 165141 Nemzetközi osztályozás: C 07 g 7/00 Feltalálók: HAGAN James J. vegyész, Holmdel, New Jersey, CHANOD Edward E. vegyész, Staten Island, New York, FELDMAN Robert S. vegyész, Howard Beach, New York CORDS Helmut vegyész, Princeton, New Jersey, Amerikai Egyesült Államok Tulajdonos: E. R. Squibb and Sons, Inc. cég, Princeton, New Jersey, Amerikai Egyesült Államok Eljárás részecskealkotó fehérjék eltávolítására vérszérumból 1 A találmány tárgya eljárás részecskeképző anyagok, például fehérjék eltávolítására vérszérumból. A vércsoport- és vértípusvizsgálatra használt vérszérumnak tisztának és részecskeképző anyagoktól mentesnek kell lennie. Firbinogén anyagot tartalmazó 5 vagy nem tartalmazó vérszérumban fehérjeszerű részecskék akkor képződnek, ha a szérumot például 2-5 órán át rázzuk. A részecskeképző fehérjék eltávolítására szérumból, több módszert javasoltak, így például az 1 196 636 számú nagy-britanniai szaba- 10 dalmi leírás eljárást ismertet normális és hemolizált szérumból és plazmából tiszta szérumalbumin előállítására oly módon, hogy a nyers albumin oldatában levő nemkívánatos fehérjéket és színezőanyagokat a nyers albumin 5-8%-os oldatának 10 tf% kloroform- 15 mai 4,95-5,05 pH-nál 50 C° hőmérsékleten való melegítésével kicsapják. Standard minőségű szérumalbuminhoz juthatunk továbbá a Cohn és munkatársai által a J. Am. Chem. Soc. 68, 3386 (1946) és 72, 465 (1950) 20 közleményekben leírt etanolos frakcionálási módszerrel. Azt találtuk, hogy vérszérumokban, például vércsoport vizsgálatra és Rh-típusú vizsgálatra szánt szérumokban fehérjeszerű részecskéknek a rázás 25 okozta képződése elkerülhető vagy késleltethető, ha a vérszérumot egy halogénezett egyenesláncú szénhidrogénnel, például kloroformmal extraháljuk anélkül, hogy szükség lenne magasabb hőmérséklet alkalmazására, ha az extrakciót 5,2 és 5,6 pH között végezzük. 30 Eszerint a találmány tárgya eljárás fehérjeszerű részecskék rázás okozta képződésének megakadályozására vagy késleltetésére vérszérumban a részecskeképző fehérjék eltávolításával oly módon, hogy a szérum pH-ját 5,2 és 5,6 előnyösen 5,2 és 5,4 közötti értékre állítjuk be, a vérszérumot egy halogénezett egyenesláncú szénhidrogénnel keverjük, és a képződött fehérjeszerű csapadékot elválasztjuk a szérumtól. A találmány szerinti eljárás végrehajtására a halogénezett egyenesláncú szénhidrogént a szérumra vonatkoztatva 1:2-2:1 vagy nagyobb térfogatarányban alkalmazzuk, de 5:1 térfogatarányon túl javulás nem észlelhető. A szérum pH-ja híg savval, például egy híg ásványi savval, mint a sósav, kénsav vagy salétromsav vagy egy híg szerves savval, mint a hangyasav vagy ecetsav, a halogénezett egyenesláncú szénhidrogén hozzáadása előtt vagy után állítható be a kívánt értékre. Ha kívánatos, az 5,2 és 5,6 közötti pH-ra beállított vérszérumot rázhatjuk a fehérjeszerű részecskék kiválásának megindítására a halogénezett egyenesláncú szénhidrogén hozzáadása előtt. Az extrakciót általában szobahőmérsékleten végezzük, de ha szükséges, 20-35 C° hőmérséklet alkalmazható a fehérjeszerű csapadék képződésének meggyorsítására. Az említett pH tartományra beállított szérumot a szénhidrogén oldószer hozzákeverése után 0,5—1,5 órán át rázzuk vagy keverjük a teljes keveredés eléréshez. Hosszabb keverés nem jár további előnnyel. 165141 1
