164997. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-(D-alfa-amino-alfa -fenil-acetilamino)-3-metil-CEF-3-ÉM-4-karbonsav enzimes előállítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja 1972. VIIL 18. TO-884 Elsőbbsége: Japán, 1971. VIIL 20. - 46-63715 1972.1.14.-47-6407 Közzététel napja 1973. XII. 28. Megjelent: 1976. IV. 15. 164997 Nemzetközi osztályozás: C 07 d 99/24 C 07 b 29/02 Fujii Tadashiro vegyész, Ohito-chó, Matsumoto Feltaláló: Kunk) vegyész, NÍrayama-cho, Shibuya Yuzo vegyész, Hanamitsu Kazumi vegyész, Yamaguchi Tsutomu vegyész, .Ohito-cho, .Tagata-gun, Shizuoka-ken, Watanabe Tetsuo vegyész, Midori-ku, Yokohama-shi, Kanagawa-ken, ABE Jinnosuke vegyész, Ohito-cho, Tagata-gun, Shizuoka-ken, Japán Tulajdonos: Toyo Jozo Kabushiki Kaisha, Ohito-cho, Tagata-gun, Shiznokeken, Japán. Eljárás 7-(D—a-amino-a-fenil- acetilamino)- 3-metil-cef-3-ém-4-karbonsav enzimes előállítására 1 A találmány tárgya eljárás 7-(D-a-amino-a-fenil-acetilamino> 3-metil-cef-3-ém-4 -karbonsav (a továbbiakban „cefalexin") előállítására 7-amino-3-metil-cef- 3-ém-4karbonsav (a továbbiakban „7-ADCA") enzimes acetilezésével. A találmány értelmében a 7-ADCA-t D-fenilglicinnel vagy annak egy származékával reagáltatjuk a 7-ADCA aminocsoportját acilezni képes enzimet termelő Alcaligenes, Achromobacter, Flavobacterium, Bacillus vagy Beneckea nembeli mikroorganizmus törzs terméke jelenlétében. Az acilező enzimet az említett mikroorganizmusok által termelt fermentlé, baktériumsejtek, enzimkivonat, szilárd enzim, illetve oldhatatlanná tett enzimkészítmény alakjában alkalmazhatjuk. A cefalexin eddig 7-(D-a-amino-a-fenilacetüamino)- 3-metü-cef-3-ém- 4-karbonsav katalitikus hidrogénezéssel való dezacetoxidálásával (67.04294 számú holland szabadalmi leírás) vagy 6-(D-a-aminoa-fenilacetilamino)- 2,2-dimetil-penám-karbonsavészter- S—oxid katalizátor és xilol jelenlétében végzett melegítéssel való gyűrűtágításával (67.04294 számú holland szabadalmi leírás) és a 7-ADCA D-a-aminofenilecetsawal való acilezésével, majd a védőcsoport eltávolításával (69,05073 számú holland szabadalmi leírás) készült. A kémiai műveletek, hidrogénezés, illetve acilezés szigorú reakciókörülményei és több lépésből álló végrehajtásuk miatt az ismert eljárások kitermelése csak körülbelül 56%, szemben a találmány szerinti eljárás 60—95%-os kitermelésével. Amellett a kémiai reakciókat különleges berendezésben kell elvégezni, szemben az általunk használt 10 15 20 25 30 szokványos fermentorral, és vegyi anyagokat tartalmazó szennyvizük kellemetlen szagú, mérgező és tisztítása körülményes. Már korábban feltaláltunk egy olyan eljárást a cefalexin közvetlen előállítására 7-(a-fenil- acetilamino)- 3-metü-cef-3-ém-4-karbonsavból (ez a vegyület a penicülin-G gyűrűtágításával kapott termék), amelyben az acilezésre Bacillus megateriurn áltál termelt enzimet használtunk (I 313 390 számú nagy-britanniai szabadalmi leírás) de ez az eljárás a csekély cefalexin-kitermelés miatt iparilag nem bizonyult előnyösnek. Ennek a találmánynak a tárgya eljárás céfalexinnek 7-ADCA-ból enzimes úton történő előállítására. A találmány tárgya iparilag megvalósítható. A találmány szerinti eljárásban cefalexin előállítására szilárd enzimkészítmény is használható. A fenflglicücsoportnak a 7-ADCA aminocsoportjába való bevezetésére alkalmas acilező enzimet termelő baktériumok szűrővizsgálata során azt találtuk, hogy az Achromobacter fajhoz tartozó, itt B—402—2-nek nevezett mikroorganizmus, valamint az Alcaligenes, Flavobacterium, Bacillus és Beneckea nemekbe tartozó mikroorganizmusok mind erős acilező hatást gyakorolnak a 7-ADCA aminocsoportjára, és 7-ADCA-ból és feriüglicinészterből csaknem kvantitative cefalexint termelnek. AB —402—2 törzs rendszertani sajátságai a következők: (a)Ferde húslé-agaron 30 C°-on 24 óra hosszat tenyésztve: 164997