164986. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új acth-jellegű polipeptidek előállítására
3 1649% 4 nem vevő funkciós csoportokat előzetesen megvédjük. A H-Sar-, vagy H-Albu-gyököt tartalmazó peptidfragment C-termnáBs karboxilcsoportja aktiválható például savanhMridképzéssel, így egy sztérikusan gátolt szerves savval, például pivaloilkloriddal vagy valamilyen karbonsavszármazékkal, például klórhangyasav- etilészterrel történő reakcióval vegyes anhidridet képezve, vagy valamilyen aktív észter, például egy nitrofenilészter, például p-nitrofenilészter, vagy egy klórozott fenilészter, például pentaklórfenilészter vagy 2,4,5-triklórfenilészter képzésével, vagy azidképzéssel, vagy kondenzálószerek, például N^í'-diciklohexilkarbodiimid vagy N,N-karbonil-bisz- imidazol használatával. Bármely szabad funkcióscsoport könnyen védhető, amely nem vesz részt a reakcióban, leginkább olyan csoportokkal melyek hidrolízissel vagy redukcióval könnyen eliminálhatók. Így például H-Sar-gyök vagy a H-Albu-gyök N-tenninÄs a-aminocsoportja például benziloxi-karbonilcsoporttal, terc-butiloxikarbonilcsoporttal, tercamiloxikarbonilcsoporttal, jMnetoxifenilszulfonilcso porttal, stb. védhető. Ezek közül e célra legalkalmasabb a benziloxikarbonil- és a terc-butiloxikarbonilcsoport. A -Lys-gyök co-aminocsoportjának védőcsoportja például a benziloxikarbonil-, terc-butiloxikarbonil-, vagy klórbenziloxikarbonilcsoport, legelőnyösebb a benziloxikarbonil- és terc-butiloxikarbonilcsoport. A fentiekben említett „maradék aminosavszekvenciának megfelelő polipeptidfragment" C-terminális karboxilcsoportját önmagukban ismert védőszubsztituensekkel, így például rövidszénláncú alkil, például metil- vagy terc-butilcsoporttal, vagy egy aralkilcsoporttal, például benzilgyökkel védhetjük. Az -Arg-gyök guanidincsoportjának védésére alkalmas szubsztituens a nitrocsoport, tozilcsoport, stb., melyek közül az előbbi a legelőnyösebb. Az -Arg-gyök guanidincsoportja úgy is védhető, hogy a guanidincsoportra hidrogénkloridot viszünk fel. A -Glu-gyök 'y-aminocsoportjának védésére terc-butil- bertzií- stb. gyökök használhatók, de a -Glu-gyök 7-karboxilcsoportja vagy az -Arg-gyök guanidincsoportja a reakció során védetlen is maradhat. A kondenzációs reakció során keletkezett poUpeptidek általában molekulájukban védett aminoes EírboxŰ-csoportokkal rendelkeznek. A védett aminocsoportnak szabad aminocsoporttá és a védett karboxil-csoportnak szabad karboxilcsoporttá történő átalakítása ismert módszerekkel történik, például egy hidrolizálószerrel, (például hidrogénfluoriddal, triíluorecetsawal stb.) vagy egy redukálószerrel (például nátriumfémmel folyékony ammónia jelenlétében stb.) kezelve. Valamennyi fentiekben említett módszer alkalmas a találmány szerinti vegyületek peptidkötéseinek kialakítására, kttfoaösen előnyösek azonban a későbbi példákban leírt e^ árasok. Mint már említettük, különböző lehetőségek vannak a találmány szerinti polipeptidek előállít!* sara. Az egyik ilyen eljárás szerint például egy X-Tyr-Ser-OH (Ha) (IIa) általános képletű tripeptidszármazékot (mely képletben X a fentiekben megadott jelentésű, a •Ser-OH gyök karboxilcsoportja aktivált és a reakcióban részt nem vevő szabad funkciós csoportok 5 védettek), egy H-Met-Glu- His-Phe-Arg- Try-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-P' (II) 01) általános képletű védett polipeptidszármazékkal (mely képletben P* -Pro-Val-Lys-Val- Tyr-NH2 10 vagy -Pro-Val-Lys-Val-Tyr- Pro-OH gyök, vagy ha X jelentése H-Sar-gyök, -Pro-Val-NH2 gyök is lehet, és a reakcióban részt nem vevő összes funkciós csoport védett), kondenzálunk, majd a védőcsoportokat eltávolítjuk. 15 Ezen eljárás során előnyös, hogy a -Ser-OH-gyök C-terminális karboxilcsoportját aktív észter, vagy azid képzésével vagy egy kondenzálószer alkalmazásával Aktiváljuk, és a kondenzációs reakció után a védett amino- és karboxilcsoportokat az így keletkezett <l iondeftzátumról hkkogénfluoridot használva lehasítjuk. Az eljárás szerint a találmány szerinti trikozapeptidet az 1. táblázatban feltüntetett módon állítjuk elő. A leírásban Z és BOC jelölések karbobenzoxicso-2b portot illetve terc-butiloxikarbonilcsoportot jelentenek, OtBu pedig a -Glu-gyök 7-karboxilcsoportján levő terc-butíl-védőcsoportot jelent. 30 /. táblázat Z-Sar-Tyr-Ser-N3 + 35 N02 Z Z I I I H-Met-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-40 Z I -Lys-NO, N02 Z 45 I I I -Arg-Arg-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-NH2 4- N02 Z w Z-Sar-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg. -Try-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Z Z N02 N0 2 Z ^ ' ' l ' ' bb -Lys-Lys-Arg-Arg-Pro-Val-Lys -Val-Tyr-NH2 I HF H-Sar-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe- Arg-Try-Gly-Lys-Pro•Val-Gly-60 -Lys-Lys-Arg-Arg-Pro-Val- Lys-Val-Tyr-NH2 Az 1. táblázatban leírt tripeptidszármazékot például a 2. táblázatban leírt szintézissel állíthatjuk 65 elő, a heneikozapeptidet pedig például a 3 651 039 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás szerint.
