164927. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-alkenil-rifamacin SV-származékok előállítására
9 16492 7 10 mUanyagpalackokban. A táptalaj az "Eagle-féle minimális lényeges táptalaj" és 10% foetális marhaszérum volt. A sejteket tripszin-EDTA-val szuszpendáltuk, a táptalajjal higitottuk és ezután a sejtszámlálást Coulter számlálókészlilékkel végeztük. Tumor-homogenátumként Moloney féle egér-sarcoma-virust használtunk. Négy passzázst végeztílnk svájci származású, nagy passzázs-számú egérembriő sejttenyészetében és a főkuszképző egységekre BALB/3T3 sejtekben vizsgáltuk. A vizsgálatok elvégzéséhez Hartley és Rowe: Proc, Nat. Acad. Sei., 55,780 (1966) által ismertetett módszer módosított formáját alkalmaztuk. A jelen esetben a palackokat a 25 ml táptalajban levő 1-2 x 10° sejtből beoltottuk és 37°C-on 24 őrán át inkubáltuk. A folyadék eltávolítása után az előre meghatározott főkuszképző egységekkel rendelkező virust 0,5 ml táptalajban adtuk és a sejtek egyetlen rétegén 37°C-on 90 percig adszorbeáltattuk. Ezt az adszorpciós periódust követően előre meghatározott mennyiségű, rendszerint kb. 5-10/*g/ml imidazol-rifamicin-vegyületet (amit előzőleg 1 mg/ml koncentrációban dimetilszulfoxidban oldottunk) 25 ml táptalajban a kultúrákhoz adtunk és azokat az inkubátorba visszahelyeztük. Kontrollként dimetilszulfoxidot önmagában is adtunk táptalajban egy külön kultúrához. 3 nap inkubálás után a kultúrák folyadékát cseréltük és a transzformált sejtek fókuszait a 7. napon megszámláltuk. Hasonló módszerrel vizsgáltuk avesicularis stomatitis virus New Jersey szerotipusát is. Ennek a virusnak a tenyésztéséhez és vizsgálatához használt módszereket Hackett és társai: Virology, 31, 114 (1967) irták le. A fenti tulajdonságok mutatják, hogy a találmány szerinti vegyületek virusok által állatokban előidézett tumorokra gátló hatást gyakorolnak. A találmány szerinti vegyületek előállítását a példák szemléltetik. 1. Példa Az analizis eredménye a C..H,.NO. összegképletre: számitott: C 64,30; H6,71; Nl,83% 5 talált: C 63,62; H6,61; Nl,30%. 2. Példa 10 3-(3-fenilhidrazono-l-butenil)-rifamicin SV 1,5 g 1. példa szerinti vegyület 50 ml tetrahidrofuránnal készitett oldatához szobahőmérsékleten, keverés közben 220 mg fenilhidrazint adunk. 2 óra 15 múlva a szilárd csapadékot kiszűrjük és etilacetátből kristályositjuk. A hozam 60%. A termék melegitve 210°C felett bomlik. X. (nm) = 475 ; 360 ; 20 max E 1 cm 181,9; 379,9. Az analizis eredménye a C._H N„0.„ összeg•" képletre: számitott: C 65,95; H 6, 71; N 4,91%; talált: C 65,40; H 6,58; N4,35%. 30 3. Példa 3-(3-fenetiloximino-l-butenil)-rifamicin SV 35 A fenti vegyületet a 2. példa szerint állitjuk elő, fenilhidrazin helyett 0-fenetil-hidroxilamint használva. A hozam 87%. O. p.: 168-173°C (bomlással). A- (nm) 4Q max Jl cm 478 ; 337 ; 262 ; 136,5; 339,4; 349,5. 3-(3-oxo-l-butenil)-rifamicin SV 45 10 g acetonilidén-trifenil-foszforánt 600ml tetrahidrofuránban oldunk, ehhez az oldathoz 7,2 g 3-formil-rifamicin SV-t adunk és a keveréket 3 őrán át visszafolyató hűtő alkalmazásával melegitjük. A reakciőkeveréket ezután kis térfogatra bepároljuk, 50 majd 300 ml etilacetátot adunk hozzá és a szerves oldatot hig savval (pH = 2), majd vizzel mossuk. A számitott szerves oldatot bepároljuk és a maradékot ! ' a cetátból kétszer kristályositjuk. A hozam 6C ,z igy kapott szilárd anyagnak nincsen 55 jól defii x olvadáspontja, 200és 290°C között lassan bom.ik. A látható és UV-tartománybanmért legfontosabb abszorpciós sávok: Vax(nm) = E /o 1 cm 485 340 160,5; 291,5; 262 386, 5; 60 65 Az analizis eredménye a C H N.O„ összegképletre: számitott: C 66, 50; H 6, 83; N 3,16%: talált: C 65,23; H 6,81; N 3,28%. 4. Példa 3-(3-benziloxi-•imino-l-butenil)-rifamicin SV 800 mg 1. példa szerinti vegyület 40mltetrahidrofuránnal készitett oldatához 160 mg O-benzil-hidroxilamin-hidrokloridot és 2 ml piridint adunk. 60 perc múlva az oldatot szárazra pároljuk és a maradékot etilacetátban oldjuk. A szerves oldatot vizzel mossuk és vákuumban bepároljuk. A maradékot etilacetátból kristályositjuk. A hozam 60%. O. p.: 183-190°C (bomlással). Xm „ (nm) max 470 ; 336; 258; váll 230-nál; 5
