164882. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-acilamino- 3-szubsztituált -tiometil- cefalosporánsav- származékok előállítására
164882 vazelin, koleszterin vagy más ismert gyógyszerhordozó anyag. A gyógyászati készítményeket például tabletta, drazsé, kenőcs, kapszula vagy folyékony állapotban oldat, szuszpenzió vagy emulzió alakjában állíthatjuk elő. Adott esetben ezek sterilizáltak lehetnek, és/vagy segédanyagokat, például konzerváló-, stabilizáló, nedvesítő- vagy emulgeálószereket, oldódást elősegítő anyagokat, az ozmózisnyomás szabályozására szolgáló sókat vagy puffert tartalmaznak. Tartalmazhatnak a készítmények más, gyógyászatilag értékes anyagokat is. E készítményeket a szokásos módszerekkel állítjuk elő. A találmány szerinti eljárást a következő példákban részletesebben ismertetjük. A hőmérsékleti értékeket Celsius fokban adjuk egm. Vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatok során a következő rendszereket használtuk: 52 A rendszer=n-butanol-jégecet-víz (67 : 10 : 23), 101 rendszer=n-butanol-piridin-jégecet-víz (38:24: 8 :30), 101 D rendszer=n-butanol-piridin-jégecet-víz (34 : 24 :12:30), 110 rendszer=n-butanol-etilacetát-piridin-jégecet-víz (42 : 21 : 21 : 6 :10), 69 rendszer=etilacetát-jégecet-víz (60 : 20 : 20). 1. példa (pH 4). Ezt a terméket közvetlenül használhatjuk fel a további reakcióban. b) 20 g 7-amino-3-(l-metil-tetrazol-5-il-tio)-metil-cef-3-em4-karbonsavat oldunk 460 ml dimetilformamid és 15,7 ml trietilamin keverékében. Ezt az oldatot erős keverés közben 25 perc alatt 1,41 g brómacetilbromid 115 ml — 20°-ra hűtött metilénkloridos oldatához csepegtetjük. A hozzáadás alatt a hőmérsékletet alacsonyan tartjuk, majd hagyjuk szobahőmérsékletre emelkedni és ezután még egy órán át szobahőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyet „Celite"-n szűrjük, majd magas vákuumban szárazjég-aceton hűtőkeverék segítségével szirupsűrűségűre pároljuk be. Ezt a maradékot 160 ml, 6,7 pH-jú 10%-os foszfátpufferoldat és 500 ml etilacetát elegyében oldjuk. Keverés közben összesen 37 ml 20%-os dikáliumhidrogénfoszfátoldat hozzáadásával a pH-t 6,0-ra állítjuk. A fázisokat elválasztjuk és a vizes fázist többször extraháljuk 500 ml etüacetáttal. A szerves fázist vetjük. A vizes fázisra 1,5 liter etilacetátot rétegezünk és erős savval a pH-t 2,8-re állítjuk. A fázisok elválasztása után a vizes fázist 1,2 liter és 1,0 liter etilacetáttal extraháljuk. A szerves fázist sorrendben kétszer 100-100 ml telített konyhasóoldattal mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és vákuumban szárazra pároljuk. A világos színű gyantát 60 ni acetonban oldjuk. 70 ml abszolút éter hozzáadásával eltávolítjuk a szennyező anyagokat. A dekantált oldathoz erőteljes keverés közben 600 ml étert és 700 ml pentánt adunk. így a 7-brómacetilamino-3-( 1 -metil-tetrazol-5-il-tio)-metil-cef-3-em-4-karbonsavat kapjuk, majdnem színtelen csapadék alakjában, amelyet közvetlenül feldolgozhatunk. 2. példa 203 mg (5 mmól) 7-[(para-aminopiridinium)-acetil-aminoj-cefalosporánsavat oldunk 10 ml 6,7 pH értékű 5%-os foszfátpufferoldatban kb. 30°-on. Ezután 166 mg szilárd 5-merkapto-l-metil-tetrazolt adunk hozzá, majd a pH-t 2,0 ml 10%K>S dikáliumhidrogénfoszfátoldat hozzáadásával 6,5-re állítjuk, eközben az összes anyag oldatba megy. Az oldatot 0°-ra hűtjük le és intenzív keverés közben tízszeres mennyiségű 0°-os metanolt adunk hozzá (120 ml). A reakcióelegyet egy órán át 0°-on állni hagyjuk, majd a kristályos foszfátot kiszűrjük. A szűrlethez a víz eltávolítása céljából többször 100—100 ml abszolút etanolt adunk és a kapott elegyet vákuumban bepároljuk. Végül kevés etilacetátot adunk hozzá és 1 órán át 0°-on állni hagyjuk, szűrjük, így egy, még foszfáttartalmú nyersterméket kapunk. Ezt száraz metanollal eldörzsöljük, szűrjük és a szűrlethez etanolt és etilacetátot adunk, így színtelen porszerű anyag alakjában nyerjük a 7-[(para-arrrinopiridinium) -acetilamino]-3-(l-metil-tetrazol-5-il-tio)-metil-cef-3--em-4-karbonsavat. Ezt az anyagot 1 ml vízben oldjuk és 25 ml Sephadex® G 10-zel (csőátmérő 1,4 cm) töltött oszlopon átszűrjük. Az első 15 ml eluátumot eldobjuk, az ezt követő 6 ml eluátum a tiszta anyagot tartalmazza. Az eluátumhoz 50 ml abszolút etanolt adunk, vákuumban kb. 2 ml-re pároljuk be, és a terméket 10 ml etilacetáttal csapjuk ki. A csapadék vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatban az 1. példában leírt eljárás szerint előállított spektrumban 2,2 g 7-brómacetilamino-3-(l-metil-tetrazol-5-il-tio)-metil-cef-3-em-4-karbonsavat oldunk 20 ml szá- 30 raz metanolban és 0,86 ml N,N-diizopropiletilamint adunk hozzá. Ezután a reakcióelegyhez 465 mg 4-amino-piridint adunk és 18 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. 20 ml etilacetát hozzáadásával csapadékként nyersterméket kapunk. Ezt a csapadé- 35 kot kiszűrjük és 20 ml 1:1 arányú víz-metanol eleggyel eldörzsöljük. Eközben az edény falaira gyantás anyag rakódik le. A visszamaradó oldatot elválasztjuk, 200 ml abszolút etanolt adunk hozzá és több órán át —10° -on állni hagyjuk. így a 40 7-[(para-arránopiridinium)-acetilamino]-3-(l-metil-tetrazol-5-il-tio)-metil-cef-3-em-4-karbonsavat kapjuk színtelen por alakjában. Ultraibolya-spektrumban (vízben) Xmax-271 nm. Vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat, szilikagélen: 45 Rf5 2a=0,08, Rft 01 =0,37, Rf! 0 1 D =0,48 és Rf,, 0 =0,07. (A kromatogramot káliumjodidos jódoldattal hívjuk elő.) A kiindulási anyagot a következőképpen állíthatjuk elő: 50 a) 50 g 7-aminocefalosporánsavat és 257,75 g 5-merkapto-l-metiltetrazolt szuszpendálunk 300 ml víz és 500 ml aceton elegyében. 370 ml telített nátriumhidrogénkarbonátoldat lassan történő adagolásával az anyagot oldatba visszük (pH=6,8 értéken). 55 Ezután a reakcióelegyet keverés közben 5 és fél órán át melegítjük nitrogénatmoszférában 60°-on. Lehűtés után az acetont vákuumban lepároljuk és a vizes óidat pH-ját kb. 60 ml 4 n sósav hozzáadásával 4-re állítjuk. Ezután éjszakán át hűtőszekrényben állni hagyjuk, a 60 képződő csapadékot szűrjük, és kevés hideg vízzel és sok acetonnal mossuk. Az így kapott nyersterméket további tisztítás céljából még egyszer feloldjuk vizes nátriumhidrogénkarbonátoldatban (pH 7 értéken), „Norit"-on és „Celite"-n szűrjük és sósavval kicsapjuk 65 10 15 20 25 30 35 40 45 0 50 55 60 4
