164639. lajstromszámú szabadalom • Eljárás többszálú, interferon- indukáló hatású poliriboinozinsav-poliribocitidilsav komplexek előállítására
11 164639 12 7. táblázat rCn ] komponens Relatív rln komponens aktivitás* Nukleotid-egy Átlagos mol. súly Nukleotid-egy-VSV ellen, Sw,20 A *8? mol. súly séges átlagos száma Sw,20 Átlagos mol. súly ségek átlagos száma sejttenyészetben, % 9,2 1,9-10 s 550 9,2 1,9-10 s 560 100 9,2 1.9-10 4 550 9,2 3,7-104 110 100 9,2 1,9« 10 4 550 3,0 2,1 -104 65 100 9,2 1,9-K) 3 550 — 1.7.1033 5 <0,05 6,0 7,8-10 s 220 9,2 1.9-105 560 20-50 3,0 2,1-10 s 60 9,2 1,9-105 560 5 1,1-10* 3 9,2 1,9-10 s 560 0 *Megjegyzés: a relatív aktivitás kiszámításához felhasznált kontroli-komplexben a rCn és rln komponensek ülepedési állandója: SW) 20 = 9,2 7. példa 20 rCn (Sw,20=9,2) 250 ml foszfát-konyhasópufferoldattal (0,006 m nátriumfoszfátot és 0,15 m nátriumkloridot tartalmazó oldat: pH = 7,0) készített, 1 mg/ml koncentrációjú oldatához 25 0,25 jug hasnyálmirigyből elkülönített ribonukleáz-A-t tartalmazó 0,1 ml oldatot adunk. Az elegyet gondosan keverjük, és az enzimes lebontást kb. 90 percig végezzük. A lebontott rCn ülepedési állandója: ^20 = 2,5. A ribonukleáz-enziinet és 30 lebontott rCn polimert tartalmazó oldathoz 9,2-nél nagyobb ülepedési állandójú nagymolekulasúlyú rln polimer 250 ml foszfátkonyhasó-pufferoldattal készített, kb. 1,07 mg/ml koncentrációjú oldatát adjuk, és az elegyet 35 gondosan keverjük. A ribonukleáz aktivitása megyszűnik, és nagymolekulasulyú rln -ből és lebontott mintegy 1.7-103 -3.7-10 4 átlag-molekulasúlyú rCn -ből felépített komplex képződik. A komplexet tartalmazó oldathoz 2 térfogat- 40 rész hideg (—20C°-os) abszolút etanolt adunk, és az elegyet kb. 15 órán át -20C°-on állni hagyjuk. A kivált terméket centrifugálással elkülönítjük, 200 ml etanollal mossuk és szárítjuk. Kb. 500 mg fehér, rostos rln lebontott rC n komplexet kapunk. A kapott kb. 500 mg komplexet 100 ml foszfát-konyhasó-pufferoldatban oldjuk, és az oldathoz 0,1 ml 0,1 mólos MgG2 -oldatot adunk. [A kapott elegy MgCl2 -koncentrációja: 0,01 mól/liter]. Az oldat kb. 5 mg/ml rIn iC n komplexet tartalmaz. Meghatározzuk az így kapott komplex egerek pneumonia vírusfertőzésével szemben kifejtett védőhatását és toxicitását: az eredményeket a nagymolekulájú rln és rC n polimerekből felépített komplex megfelelő adataival hasonlítjuk össze. Az eredményeket a 8. táblázatban ismertetjük. Az adatokból kitűnik, hogy a lebontott poliribocitidilsawal készült toxicitása kedvezőbb, mint a nagymolekulájú poliribocitidilsawal készült komplexek toxicitása. 8. táblázat Nagy mintegy 8.106 molekulasúlyú Egéren PVM fertőzéssel szemben kifejtett védőhatás Toxicitás rln -el komplexet túlélők %-os Dózis túlélő/összes kb.LDjo képező anyag rIn arCn túlélő/összes növekedése /«/egér állatok száma mg/kg dózis Mg/egér állatok száma kontrollhoz képest Lebontott mintegy 4 15/20 70 2 20/25 1,7-1Ó3 -3,7-104 1 16/20 75 1 25/25 30,4 mólsúlyú rCn 0,25 8/20 35 0,5 25/25 30,4 0,25 25/25 Nagy mintegy 8l 10* 4 13/20 60 0,5 20/25 molekulasúlyú rCn 1 16/20 75 0,25 25/25 4,65 0,25 9/20 40 0,125 0,063 25/25 25/25 Kontroll (foszfát-0 3/60 _ konyhasó-puffer)
