164498. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glükoprotein előállítására
164498 3 4 Sei. 268, 2536 (1969)] módszert ismertettek hisztaminopexiás hatású anyagban dús frakciók előállítására szérum-fehérjéből. A szerzők megállapították, hogy ezek a frakciók nem immunoglobulinok. Más részről a szerzők elektroforetikus és immuno-elektroforetikus elemzéssel (emberi plazma anti-protein immunoszérummal) egy ß— 1 mozgékonyságú globulin és egy albuminsZerű mozgékonysággal rendelkező fehérje jelenlétét mutatták ki. A szérum-komponens G200 Sephadex gélen végzett tisztításával már olyan aktív frakciót kaptak, amely mg-onként 50000 egység hisztaminopexiás aktivitást mutat. A fentiek alapján megállapítható, hogy a hisztamin lekötésére képes szérum-komponens terméstzietére, azonosságára és egységességére vonatkozóan a szakirodalom eltérő és bizonytalan adatokat közöl. A találmány szerinti új elkülönítési és tisztítási módszerrel a hisztaminopexiás hatást okozó frakció rendkívül tiszta állapotban állítható elő. A találmány szerinti extrakciós és tisztítási műveleteket továbbá állati eredetű szérumfehérjék és a placenta kezelésére is kiterjeszthetjük, azaz nagymértékben szélesíthetjük a szérumkomponens forrásaként alkalmazható anyagok körét. Vizsgálataink során kémiailag azonosítottuk a rendkívül tiszta állapotban elkülönített, hisztaminopexiás hatású frakciót, és megállapítottuk, hogy az a globulinoktól, immunoglobulinoktól és egyéb fehérjéktől egyaránt különböző vegyületet tartalmaz. Az általunk végzett elemzések és mérések tanúsága szerint a hisztamki lekötésére képes szérumnkomponens egy glükoprotein. A találmány szerinti eljárás előnye, hogy a kívánt frakciót antigén anyagoktól (egyéb fehérjéktől illetve heterogén eredetű fehérjéktől) mentesen, rendkívül tiszta állapotban állíthatjuk elő. A találmány szerint tehát nem egyszerűen egy szérumfrakciót különítünk el, hanem egy meghatározott, fizikai és kémiai adatokkal, valamint biológiai kísérletekkel és hisztamin-lekötő hatás vizsgálatával azonosítható kémiai anyagot állítunk elő, amely a gyógyászatban széles körben felhasználható iallengiás állapotok kezelésére. A rendkívül tiszta, emberi vagy állati eredetű szérumfrakció előállításával korlátlan mennyiségű hisztaminopexiás hatású anyagot bocsáthatunk a gyógyászat rendelkezésére. Ezek az anyagok eredetükre való tekintet nélkül egyaránt felhasználhatók a gyógyászatban. Tekintettel arra, hogy a találmány szerint a glükoproteint rendkívül tiszta állapotban állíthatjuk elő, egyértelműen meghatározhatjuk a glükoprotein azonosítására alkalmas fizikai-kémiai jellemzőket. Ezek a jellemzők a következők: — a glükoprotein fitinsav-oldatokban oldódik, azaz savas jellegű — az ammóniumszulfátos lecsapás optimális koncentrációtartománya pH = 7,0 értékű közegekben 2,5 mól és 2,8 mól között van. Ez az igen szűk konoentrációtartomány jelzi, hogy a kapott vegyület nem immunoglobulin, az utóbbiak 5 ugyanis sokkal kisebb moláris koncentrációjú ammóniumszulfát-oldatdkkal csaphatók ki. — A termék G200 Sephadex gél-szűréssel meghatározott molekulasúlya 100 000-nél nagyobb, körülbelül 150 000. 10 — A termék agarózon, cellulózacetáton vagy szaccharózon, koncentrációgradiens, fenntartásával meghatározott elektroforetikus mozgékonysága a prealbumiinokéval azonos. A Ve/Vo arány 1,30 és 1,75 között van. 15 — Elektromos koncentrálás szerint a termék izoelektromos pontja a 4,0 érték közelében van. — A termék hisztaminopexiás hatása neuramidinázok hatására megszűnik. Ennek megfelelően a termék glükoprotein, amely 20 — vízben oldódik. Ügy tekinthetjük, hogy allergiás állapot fellépésekor a biológiai eredetű aminők, elsősorban a hisztamin abnormálisan nagy mértékben szabadul fel. A test nedveire vonatkozó „pexiás" ha-25 tás megnövekedik. A hisztaminopexiás hatással rendelkező glükoprotein gyógyászati célja az, hogy a pexiás hatást normalizálja vagy fokozza. Ezen túlmenően, egyes akut allergiás állapotokban a hisztaminopexiás hatású frakció szoká-30 sos elméleti koncentrációja nagymértékben (kb. 5—10 mg/literrel) csökken. Hisztaminopexiás glükoproteinek beadagolásával megelőzhetjük ezt a csökkenést, illetve az abnormálisan kis mennyiségű hisztaminopexiás anyagot tartakna-35 zó szervezetekben növelhetjük a hisztaminopexiás hatóanyag mennyiségét. A fenti gyógyászati célokra a hisztaminopexiás hatású glükoproteint perlinguálisan, parenterálisan, rektálisan, helyileg vagy permukáli-40 san adhatjuk be: A hisztaminopexiás hatású glükoproteint tartalmazó gyógyászati készítmények szublinguális tabletták, egy vagy több dózist tartalmazó ampullás készítmények, kúpok, krémek, kenőcsök, 45 olajok, belégző permetek, orrcseppek és aeroszolok lehetnek: A gyógyászati készítmények a hisztaminopexiás hatású glükoproteinen kívül egyéb gyógyászati hatóanyagokat, illetve hatásfokozásra al-50 kalmas szereket is tartalmazhatnak. Így például az aeroszolos készítményekhez tüdőtágító hatású anyagokat, például izoprenalint adhatunk. A hatóanyag dózisa a beadás módjától, a beteg panaszainak jellegétől és a beteg testsúlyá-55 tói függően változhat. Perlinguális adagolás esetén a napi dózis 5 mg és 20 mg közötti érték lehet. Az injekciós készítményeket — elsősorban az intramuszkuláris injekciós készítményeket — 5, 10 vagy 20 mg 60 glükoproteint tartalmazó ampullás egységdózisók formájában alkalmazhatjuk, és a hatóanyagot napi 1 mg/kg mennyiségben adhatjuk be. Külsődleges kezelésre szánt készítmények — például krémek és kenőcsök — általában 0,1—0,5% 65 hatóanyagot tartalmazhatnak. 2
