164431. lajstromszámú szabadalom • Eljárás noretiszteron származékok előállítására mikrobiológiai úton
164431 5 6 sporium asperum (MNG 82) törzs, ha a noretiszteron helyett 6/?-hidroxi-, illetve 10/2-hidroxi-noretiszteront alkalmazunk szubsztrátumként az átalakításnál. Csak olyan módon magyarázható ez, ha a vegyület mikrobiológiai úton kialakított hidroxil-csoportjai közül az egyik 6ß-, a másik 10:/5-.helyzetű. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg: 1. példa: Rhizopus arrhizus ((MNG 86) egyhetes, burgonyás ferdeagaron nőtt tenyészetéből 10 ml steril vízzel szuszpenziót készítünk, és ennek 1 ml-ével oltunk 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban sterilezett 100 ml táptalajt, melynek összetétele: pepton 0,8% dextróz 1,8% malátakivonat 0,8% kukoricalekvár szárazanyagtartalom 0,2% NaCl 0,2% A lombikot 28 C°-os termosztát-szobában rázatva inkubáljuk 1 napig, majd átoltjuk 5 1 fenti összetételű 10 literes üvegfermentorban levő táptalajra. A tenyészetet 300/perc fordulatszámmal kevertetjük 5 l/perc levegő átáramoltatása mellett 28 C°-os vízfürdőben. Két nap múlva a tenyészethez 1 g 17; /?-hidroxi-17«-etinil-ösztr-4-én-3-ont adagolunk 40 ml dimetilformamidban oldva, és folytatjuk az inkubálást még 1 napon át. Ezután a fermentlét leszűrjük, majd 3XV4 térfogat etilacetáttal extraháljuk. Az egyesített extraktumot vákuumban bepároljuk. A maradékot acetonból kristályosítva 370 mg 10'/?,17/?-dihidroxi-17ia-etinil-ösztr-4-én-3-ont kapunk; op. 263—265 C°; [a]D = —13,5° (c = l, dioxán); Xmax : 235 m/u (e = 13 700). Elemzési eredmény a C20H26O3 képletre (M = = 314,43) vonatkoztatva: számított: C 76,40% H 8,34%; talált: C 76,44% H 8,37%. Infravörös színkép i(KBr): vOH 3200—3600/ /max. 3360 és 3460/cm"1, (s=CH) 3250 cm" 1 , 5-0=0 1650 cm"1 (3-as keton), vC=C 1615 cm" 1 (z!4-es kettős kötés). A kristályosítási anyalúgot bepároljuk. A maradékot preparatív rétegkromatográfiával tisztítjuk 1 mm vastagságú szilikagél-rétegen 10% etilalkoholt tartalmazó kloroform futtató rendszert alkalmazva. Így további 105 mg lüfi^tfi-dihidroxi-17«-etinil-ösztr-4-én-3-onhoz jutunk. 2. példa: Sclerotiniasclerotiorum i(MNG 83) egyhetes burgonyás ferdeagaron nőtt tenyészetéből 10 ml steril vízzel készített szuszpenzió 1—1 ml-ével 3 db 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban sterilezett 100—100 ml táptalajt oltunk, melynek öszszetétele: 5 % malátakivonat, 5 1 % szójaliszt, 1 % pepton, 1 % élesztőkivonat, 0,5% KH2 P0 4 , 0,5% MgSCv7 H2 0. 10 A beoltott lombikokat 24 C°-os termosztátszobában rázatva inkubáljuk 2 napig, majd átoltjuk 5 1 fent ismertetett összetételű 10 l-es fermentoros üvegben sterilezett táptalajra. A 13 tenyészetet 300/perc fordulatszámmal kevertetjük 5 l/perc levegő átáramoltatása mellett 24 C°-os vízfürdőben. Egy nap múlva a tenyészethez 2 g 17'/^hidroxi-17ia-etinil-ösztr-4-én-3-oiTt adagolunk 80 ml dimetilformamidban oldva. Há-20 rom nappal később a fermentlét leszűrjük, a szűrletet 3XV4 térfogat etilacetáttal extraháljuk. Az egyesített extraktumot vákuumban bepároljuk. A maradékot az 1. példában leírt módon preparatív rétegkromatográfiával tisztítva 25 780 mg 10^,17^-dihidroxi-l7a-etinil-ösztr-4-én-3-ont nyerünk. 3. példa: 30 Absidia orchidis (MNG 13) 2 db egyhetes burgonyás ferdeakar on nőtt tenyészetéből 10—10 ml steril vízzel szuszpenziót készítünk, melynek 1—1 ml-ével 20 db 500 ml-es Erlenmeyer-3g lombikban sterilezett 100—100 ml 1. példa szerinti táptalajt oltunk be. A beoltott lombikokat 28 C°-os termosztát-szobában rázatva inkubáljuk 2 napon át. Ezután a lombikokba 20—20 mg 17/?-hidroxi-17la-etinil-ösztr-4-én-3-ont ada-40 gólunk 1—1 ml dimetilformamidban oldva, majd az inkubálást még <2 napig folytatjuk. Ezután a 2. példában leírtak szerint eljárva kinyerjük a 10ß, 17/?-dihidroxi-l 7«-etinil-ösztr-4-én-3-ont a fermentléből. 45 4. példa: 17i/?-hidroxi-l 7a-etinil-ösztr-4-én-3-onból 10',/?,-17/ 3-dihidroxi-17a-etinil-ösztr-4-én-3-ont állítunk 50 elő, olyan módon, hogy az átalakítást végző mikroorganizmus tenyésztését, a szubsztrátum átalakítását és a termék kinyerését a 3. példában leírtak szerint végezzük, de mikroorganizmusként az Absidia orchidis (MNG 13) törzs 55 helyett Curvularia lunata (MNG 80), vagy Cladosporium herbarum (MNG 84), vagy Mycogone rosea (MNG 85) törzset alkalmazunk. 5. példa: 60 Arthrobacter simplex (MNG 66) egyhetes, burgonyás ferdeagaron nőtt tenyészetéből 10 ml steril vízzel szuszpenziót készítünk és ebből 1 ml-rel oltunk 100 ml 0,44% KH2 P0 4 -ot, 0,88% 65 Na2 HP0 4 -7 H 2 0-ot és 2,0%. élesztőkivonat szá-3
