164378. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bakteriális eredetű enzimfehérjék kinyerésére fermentlevekből, szelektív frakcionált dúsítással

164378 7 8 8. példa: Szabadalmi igénypontok: Bacillus subtilis 11722 törzs (az OKI-ban 62-es szám alatt deponálva) komplex táptalajon történő tenyésztése után a fermentlé tejoltó enzim aktivitása 700,0 RU/íml [Mérési módszer: Élelmiszertudomány 3, 12^23 (1969)]. A fermentlé 1 literének pH-ját 6,0-ra állítjuk és 0,5% tannint adagolunk hozzá 10%-os oldat formájában kevertetés közben. 2 órai állás után a csapadékot lecentrifugáljuk. A nyers enzim-tannin komplex súlya 35 g, 20 000 RU/g aktivitású, a kihozatal 100%. A keletkezett csapadékot a következő fermentáció 500 RU/ml aktivitású fermentlevének 1 literébe visszalkevertetjük pH = = 8 értéken 0,1 m borát puffer jelenlétében. 5 órai kevertetés után 0,2% cetil-piridinium-bromidot adunk a szuszpenzióhoz, majd lecentrifugáljuk. 900 (ml éles lé keletkezik. Az éles levet filmbepárlón tizedrészére besűrítjük. Keletkezik 90 ml 7340 RU/ml aktivitású lé 55%-os kitermeléssel. 9. példa: A feldolgozási feltételek azonosak a 8. példában leírtakkal, de a besűrített léből 54 g ammónium-szulfáttal pH = 6,0-on +5 C°-on kisózzuk az enzimet. Keletkezik 5 g 132 000 RU/g aktivitású termék 55%-os kitermeléssel. 10 1. Eljárás bakteriális eredetű enzimfehérjék: a Bacillus subtilis var. proteolyticus (OKI deponálási száma 54/69) proteáza és Bacillus subtilis 11 722 törzs (OKI deponálási száma 62) rennin enzimének kinyerésére fermentlevekből szelektív frakcionált dúsítással azzal jellemezve, hogy a fenti exo-enzimek nyers fermentlevét tanninnal vagy ammóniumszulfáttal kezeljük, a keletkezett hasznos enzimifehérjéket tartalmazó csapadékot egy másik gyártási tétel azonos, vagy fele térfogatú fermentlevéhez adjuk és az enzim beoldódása alatt a pH-t 7,0—0,0 kö-15 zött tartjuk, a hőmérsékletet szobahőfokra állítjuk és az ionerősséget meghatározó puffer koncentrációját 0,05—0,2 mól/liter értéken tartjuk, alkil-piridinium-lhalogenidet adunk a hasznos enzimfehérjét tartalmazó oldathoz, majd a szennyeződések kiválása és azok eltávolítása után a tiszta enzim oldatiból ismert enzimkinyerési eljárással az enzimfehérjét kinyerjük. 2. 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a tannint 0,5—1,0% mennyiségben alkalmazzuk, és az ammóniumszulfátot l

60% mennyiségben használjuk a fermentlé térfogatára számítva. 3. Az 1. és 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy alkilpiridinium-haloigenidként cetil-piridinium-bromidot alkalmazunk 0,05—0,20% mennyiségben a fermentlé térfogatára számítva. 20 25 30 A kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 75.6112/4 — Zrínyi Nyomda, Budapest. F. v.: Bolgár Imre vezérigazgató 4