164378. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bakteriális eredetű enzimfehérjék kinyerésére fermentlevekből, szelektív frakcionált dúsítással

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG Vs& £... ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY Bejelentés napja: 1972. III. 31. (BI—437) Közzététel napja: 1973. IX. 27. Megjelent: 1975. X. 31. 164378 Nemzetközi osztályozás: C 07 g 7/02; 7/028 Feltalálók: Harcsa Jánosné (Marossy Katalin) vegyész, 30%, Dr. Bálint János vegyész, 10%, Debrecen. Jäger Sándorné vegyészmérnök, 10%, Ferenczi Vilmosné vegyészmérnök, 10%, Budapest, Pintér László vegyész, 7%, Vig János biológus, 5%, Debrecen, Takács István gépészmérnök, 5%, Budapest, Veress Gyula vegyész. 5%, Tát, Schrádi Antal vegyész, 4%, Avar Berta vegyésztechn., 4%, Kovács Lászlóné vegyésztechn., 4%, Székely Barnáné vegyésztechn., 4%, Menyhárt András vegyésztechn., 2%, Debrecen Tulajdonos: Biogial Gyógyszergyár, 50%, Debrecen; Richter Gedeon Vegyészeti Gyár Rt., 50%, Budapest Eljárás bakteriális eredetű enzimfehérjék kinyerésére fermentlevekből, szelektív frakcionált dúsítással i A találmány tárgya eljárás bakteriális eredetű enzimfehérjék: proteáz, rennin kinyerésére fermentlevekből, szelektív frakcionált dúsítással. Mint ismeretes, a bioszintetikus úton előállított enzimfehérjék fenmentlevében inaktív fe- 5 hérjék, táptalajkomponensek, habzást csökkentő olajok és egyéb kísérő anyagok találhatók. A hasznos enzimfehérje koncentrációja minden esetben meglehetősen kicsi .a kísérőanyagok mennyiségéhez képest. 10 A bakteriális eredetű enzimfehérjék fermentléből való kinyerésére szolgáló eljárások közül a legismertebb és manapság is az egyik leggyakrabban használt az, amikor az enzimfehérje kisózására ammónium-szulfátot alkalmaznak (69 13 13936 sz. holland, 1.936.437 és 2.018.451 sz. NSzK-beli szabadalmi leírások). Az eredeti szűrt fermentléből történő kisózásos eljárás hátránya abban rejlik, hogy nagy sokoncentrációt igényel, ugyanakkor szinte min- 20 den fehérjét és esetleg más kísérő anyagokat is leválaszt az oldatból, ezért relatíve kis fajlagos aktivitású enzimfshérje nyerhető. Az enzimfe'hérjék kinyerésére más eljárásokat is kerestek. A fermentlé megfelelően kivá- 25 lásztott adszorbensen való áteresztése során az enzimfe'hérjék megkötődése szelektív elválasztást eredményezhet, de ezek az eljárások sok esetben egészen speciális adszorbenseket igényelnek (804.608. sz. angol, 3.104.206. sz. USA-beli sza- 30 badalmi leírások). Az adszorpció és az azt követő enzimkinyerés miatt az eljárás minimálisan két lépésből áll és a kitermelés a lépések számának növelésével általában csökken, enzimfehérjétől függően 30—70% között ingadozik. Az egyéb ismert eljárások közül megemlítjük még, hogy a természetes és mesterséges cserzőanyagok is alkalmasak az enzimfehérjéknek a fermentléből való kinyerésére (1.028.232 és 1.181.484 sz. angol szabadalmi leírások). A természetes eredetű cserzőanyagok közül többnyire a tannint alkalmazzák, mivel az enzimfehérjékkel jól elkülöníthető, oldhatatlan komplexet képez. Az oldhatatlan enzim-tannin komplexből a tannin eltávolítására oldószereket használnák (66.604 sz. NDK-beli, illetve a 412.755 sz. svájci szabadalmi leírás), vagy pufferoldatokkal (15.840/35 sz. japán szabadalmi leírás), polioxi-etilén-szorbitol^monosztearattal (6874/45 sz. japán szabadalmi leírás), illetve többértékű alkoholokkal (7833/41 sz. japán szabadalmi leírás) magát az enzimfehérjét oldják ki a komplexből. A tannin-enzim komplex alkalmazhatósági tartománya rendkívül szűk, sötét színe és csekély oldhatósága miatt. így az említett eljárások minden esetben kétlépéses enzim feldolgozást igényelnek és sok esetben olyan költséges vegyszereket használnak fel, mint pl. a glicerin, a szorbit, stb., amelyek alkalmazásával nincs 164378