164371. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kallikrein, valamint a kallikrein A és B komponenseinek tisztítására és kristályosítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1972. XL 01. (BA—2822) Német Szövetségi Köztársaság-beli elsőbbsége: 1971. XI. 03. (P 21 54 557.3), (P 21 54 556.2) Közzététel napja: 1973. IX. 27. Megjelent: 1975. X. 31. 164371 Nemzetközi osztályozás: C 07 g 7/026 Feltalálók: Dr. Kutzbach Carl vegyész, Dr. Schmidt-Kastner Günther vegyész, Wuppertal, Német Szövetségi Köztársaság Tulajdonos: Bayer Aktiengesellschaft, Leverkusen, Német Szövetségi Köztársaság Eljárás kallikrein, valamint a kallikrein, A és B komponenseinek tisztítására és kristályosítására A találmány tárgya eljárás kallikrein, valamint a kallikrein A és B komponenseinek tisztítására és kristályosítására. Közelebbről a találmány a kallikrein A és a kallikrein B komponensekből álló kallikrein tisztítására és kristályosítására, az adott esetben kristályos komponensek előállítására, valamint ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására vonatkozik. Ismeretes, hogy ha a szervezetben előforduló kininogénre kallikrein hat, akkor a vérkeringést befolyásoló kininek válnak szabaddá. Ezért kallikrein-készítményéket használnak különböző vérkeringési zavarok terápiás kezelésére (E. K. Frey, Kraut, H. és Werle, E.: Das Kallikrein-Kinin-System und seine Inhibitoren, F. Enke kiadóvállalat, Stuttgart, 1968. 150 oldal f). Napjainkig terápiás célokra hasnyálmirigyből, submaxillarisból és vizeletből készült, részben tisztított kallikrein-készítményeket használtak. Ismeretes tehát, hogy hasnyálmirigyből, submaxillarismirigyből és vizeletből kallikrein-készítmények állíthatók elő. Részben tisztított kallikrein elkülönítésére különböző eljárások ismerték, így például a 890 857 számú Német Szövetségi Köztársaság-beli szabadalmi leírásban ismertetett eljárás szerint kallikreint tartalmazó mirigyeket vizes szuszpenzióban 38 C° és 65 C° között termolízisnek vetnek alá, majd a kallikreint tartalmazó vizes fázist az oldhatatlan részektől elkülönítik. Részben tisztított kallikrein elkülönítésére ismeretes a 910 580 számú Német Szövetségi Köztársaság-beli szabadalmi leírás, mely szerint a vizeletet, valamint 5 a hasnyálmirigy vágy a submaxillaris mirigy autolizátumait ólom- vagy cinksókkal kezelik, a kapott csapadékokat elkülönítik, foszfátpufferoldatokban, különösen diammónium-hidrogén-foszfát-oldatokban feloldják, a kapott oldato-10 kat dializálják, a dializátumokat betöményítik, és a koncentrátumokból a hatóanyagot valamilyen szerves oldószerekkel, így például etanollal vagy acetonnal kicsapják. A kallikrein előállítható emberi vizeletből is a 19067/1971 szá-15 mú japán szabadalmi bejelentésben (Chem. Abstr., 75, 73872n) ismertetett módon szilikagélen pH 4 értéken végzett adszorbeáltatással, pH 8,0 értéken végzett eluálással, ammónium-szulfáttal végzett kisózással és pH 6 értékű 0,5 20 mólos foszfátpufferben CM-Sephadex márkanevű ioncserélővel végzett kezeléssel. Az így kapott kallikrein azonban csak részben tisztított. A még nem tisztított kallikrein-készítmények 25 például az 1 102 973 számú Német Szövetségi Köztársaság-beli szabadalmi leírásban ismertetett módon tovább tisztíthatók. E leírás szerint a kallikreint pH 3 és pH 10, különösen pH 6,0 és pH 7,5 között bázikusan helyettesített cellu-30 lózon adszorbeáltatják, a bázikusan helyettesí-164371