164353. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cefaloszporin C előállítására
164353 10 hogy a mikroorganizmus spóráit az alábbi öszszetételű táptalajba oltjuk be: Ezred súlyrész Zsírolaj 1 Kukoricalekvár 20 Ammónium-acetát 6 Szacharóz 20 A fenti összetételű beoltott táptalajt levegőztetett úrlenmeyer-lombikban 26—30 C°-on 72 órán át inkubáljuk. A beoltott fermentorban a táptalajt ezután 92 órán át 22—28 C°-on tartjuk. A fermentorba ezután további táptalajt adagolunk be 260 ml/óra arányban úgy, hogy a hígítási arány mintegy 0,25 térfogatesere/nap legyen. A hőmérsékletet 22—24 C°-on tartjuk, a keverés értéke 350 fordulat/perc és a levegőztetés aránya 0,5—1 liter/liter/perc a folyamatos tenyésztési eljárás során. A folyamatos tenyésztés 15 napja alatt összesen 93,6 liter táptalajt gyűjtöttünk össze az alábbi, I. táblázatban ismertetett cefaloszporin C koncentrációkkal. I. táblázat „ Cefaloszporin C Tenyésztési Összegyűjtött konce ntrációja idő térfogat (mifcro _ <óra ) <ml ) gramm/ml) 92 116 140 164 188 212 236 260 284 308 332 356 380 404 428 452 7. példa: 0 6240 6240 6240 6240 6240 6240 6240 6240 6240 6240 6240 •6240 6240 6240 6240 2180 2090 2260 2010 2375 2400 2130 2210 2175 2200 2190 2000 2260 2190 2290 2070 93.600 A 6. példában leírt összetételű táptalajból egyenként 6 litert tartalmazó négy fermentort beoltunk Cephalosporium Sp. F 12 spórákkal. A fermentációs hőmérsékletet 23 ± 0,5 C°-on tartjuk, míg a levegőztetés 0,5 liter/liter/perc értékű. A J—1 jelöléssel jelzett fermentort kontrollként használjuk. A J—2, J—3 és J—4 jelölésekkel jelzett fermentorökba 96 óra eltelte után friss és steril tápanyagot adagolunk, 0,0104 térfogat/ 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 /óra, 0,0154 térfogat/óra és 0,0208 térfogat/óra lecserélési sebességgel. Az összegyűjtött lecserélt tápanyag mennyiségét és a megfelelő cefaloszporin C koncentrációkat a II. táblázatban adjuk meg. Az egyes fermentorok oszlopában az első számoszlop az összegyűjtött lecserélt térfogat (literekben) a jelzett időkben, míg a második számoszlop a cefaloszporin C koncentrációja a táptalajban (mikrograimm/milliliterben) ugyanazokban az időpontokban. II. táblázat Tenyésztésiidő Fermentor (óra) J" 1 J-2 J-3 J—4 96 6 2.200 1.5 2.150 2.25 2.360 3 2.090 120 144 168 192 216 240 264 288 312 336 360 384 408 432 456 480 6 2.280 6 2.120 6 2.220 6 2.250 1.5 2.230 2.25 2.800 3 2.S00 1.5 2.180 2.25 2.300 3 2.170 1.5 2.200 2.25 2.370 3 2.220 1.5 2.310 2.25 2.150 3 2.295 1.5 2.090 2,25 2.410 3 2.170 1.5 2.050 2.25 2.295 3 2.260 1.5 2.190 2.25 2.420 3 2.300 1.5 2.235 2.25 2.290 3 2.100 1.5 2.000 2.25 2.450 3 2.250 1.5 1.900 2.25 2.500 3 2.300 1.5 1.970 2.25 2.490 3 2.350 1,5 1.720 .2.25 2.370 3 2.300 1.5 1.810 2.25 2.415 3 2,280 1.5 1.700 2.25 2.500 3 2.320 1.5 1.700 2.25 2.480 3 2.310 6.0 1.780 6.0 2.515 6 2.320 A III. táblázatban megadjuk a 20 napos fermentációs időszak alatt összegyűjtött táptalaj teljes mennyiségét, a cefaloszporin C átlagos titerét, valamint az egyes fermentorokban összesen előállított cefaloszporin C mennyiségét. Fermentor J—1 J—2 J_3 J—4 Összesen összegyűjtött táptalaj térfogata (literben) Átlagos titer (mikrogramm/ /ml) a 20 nap alatt előállított cefaloszporin C összmennyisége (g) 30 30 42 54 2214 2012 2390 2250 66,4 60,4 100,4 121,5 Szabadalmi igénypontok: 65 l. Eljárás cefaloszporin C előállítására, cefalo-5
