164353. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cefaloszporin C előállítására

164353 5 6 Kressel és 'Gourevitch: „Antimicrobial Agents and Chemotherapy", 131. o. {1969)] vagy mikrobiológiai úton határozhatjuk meg. A találmány szerinti eljárás végezhető folyamatosan folyamatos tenyésztő berendezésben úgy, hogy a steril táptalajt egy vagy több növesztő edénybe tápláljuk, és a sejtszuszpenzió eltávolítása automatikusan történik. Adott időközökben a fermentációs közeg egy részét eltávolítjuk, és megfelelő mennyiségű friss tápanyagot adunk a tenyészethez. Ezt a műveletet általában a kultúra tenyésztésének megkezdése után 75—110 órával végezzük. A friss tápanyagot a rendszerbe juttathatjuk folyamatosan működő adagoló szivattyú segítségével, és az elvezetés arányát úgy szabályozhatjuk, hogy állandó munkatérfogat és a tenyészetet tároló edényben állandó sejtkoncentráció alakuljon ki. A folyamatos tenyészet hígítási arányát alkalmasan 0,2 és 0,8, előnyösen 0,4 és 0,5 között tartjuk, a térfogat így naponta kicserélődik. f A találmány szerinti eljárással előállított cefaloszporin C elkülönítése a tenyészetből ismert módon történik, majd a kapott nyers keveréket megtisztítjuk, például szűréssel, aktív szénnel végzett derítéssel, ioncserélő gyantán végbemenő adszorpció útján, ezután vizes bázissal, így piridinnel eluálva, majd az oldószert elpárologtatva kristályos terméket kapunk. A találmányt az alábbi példákkal közelebbről megvilágítjuk. 1. példa: Rozsdamentes acélból készült, 27 liter térfogatú, kevert és levegőztetett fermentorba az alábbi összetételű táptalajt adagoljuk be: Földimogyorólisz 60 rész Keményítő 40 rész Metil-oleát 8 rész Zsírolaj 60 rész Szacharóz 5 rész Glükóz 7 rész CaC03 10 rész Bórax 0,5 rész DL-metionin 15 rész víz feltöltés 1000 részi 1. minta rész Földimogyoróliszt 60 Keményítő 40 Metil-oleát 6 Zsírolaj 60 Szacharóz 5 Glukóz 7 CaC03 10 Bórax 0,5 DL-metionin 1,49 Metil-tioglikolát — Tioecetsav — A táptalaj pH-értékét 7,2 és 7,8 közé beállítjuk, majd gőzzel sterilizáljuk 120 C°-on 25— 30 percen át. A fermentort ezután beoltjuk 5—10 térfogat% 5 Cephalosporium Sp. F 12 törzs növekvő tenyészetével, mely oltóanyagot úgy készítjük el, hogy a mikroorganizmus spóráit az alábbi összetételű táptalajba oltjuk be: 10 Zsírolaj 0,1% Kukoricalekvár 2,0% Ammónium-acetát 0,6% Szacharóz 2,0%. 15 A beoltott táptalajt ezután levegőztetett Erlenmeyer-lombikban 72 órán át 24—28 C°-on inkubáljuk. A táptalajt tartalmazó beoltott fermentort ezután 22—28 C°-on tartjuk 130 órán át, és e 20 periódus alatt a levegőztetés szintjét 1 liter/perc értékűre állítjuk be, míg a keverés nagysága 300—450 fordulat/perc. A kapott tenyészet milliliterenként 4500—5000 mikrogramim cefaloszporin C-t tartalmaz (átlagérték). 25 2. példa: 25,4 mm-es ferde táptalajon növő Cephalosparium Sp. F 12 törzs tenyészetet 5 ml steril 30 vízben szuszpendáljuk, és 500 ml, az alábbi öszszetételű oltóközeg beoltására használjuk: Kukoricalekvár 25 rész Szacharóz 20 rész 35 Ammónium-acetát 4,5 rész Zsírolaj 0,5 rész Víz feltöltés 1000 részre A beoltott oltóközeget ezután 24—28 C°-on 40 inkubáljuk 72 órán át forgó rázógépben (220 fordulat/perc) különböző kénvegyületek jelenlétében (1000 ml táptalaj 0,01 mól ként tartalmaz). Az így kapott oltóanyaggal ezután négyszer 60 ml, az alábbi összetételű tápanyagból 45 álló mintát oltunk be, majd a mintákat 22—28 C°-on tartjuk 114 órán át, miközben forgó rázógépben (250 fordulat/perc) rázzuk ezeket. A kísérlet eredményeképpen a táblázatban látható mennyiségű oefaloszporin C (mikrogramm/ml 50 táptalaj) képződik. 2. minta 3. minta 4. minta rész rész rész 60 60 60 40 40 40 6 6 6 60 60 60 5 5 5 7 7 7 10 10 10 0,5 0,5 0,5 0,06 — — — 0,76 —