164116. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fermentációs úton nyert nyers peptid-alkaloidbázisok tisztítására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY Bejelentés napja: 1972. III. 24. Közzététel napja: 1973. VII. 28. Megjelent: 1975. V. 31. (RI-462) 164116 Nemzetközi osztályozás: C 12 d 13/00, C 07 d 43/20 / '»' Feltalálók: Szarvady Béla okleveles vegyész 30%, Székely Dénesné okleveles vegyész 20%, Szolnoki József vegyészmérnök 10%, dr. Udvardy-Nagy Istvánná orvos 10%, Wack Géza mikrobiológus 10%, dr. Zöllner Gyula okleveles vegyész 20%, Budapest Tulajdonos: Richter Gedeon Vegyészeti Gyár Rt., Budapest Eljárás fermentációs úton nyert nyers peptid-alkaloidbázisok tisztítására 1 A találmány tárgya eljárás fermentációs úton nyert nyers peptid-alkaloidbázisok tisztítására. A mikrobiológiai kutatás és a fermentációs ipar rohamos fejlődése legújabban lehetővé tette az anyarozs alkaloidok szaprofita tenyészetekben történő előállítását (975 919 és 1 073 689 lajstromszámú NSZK-beli —, 104 613 lajstromszámú csehszlovák-, 1158 380 lajstromszámú angol, valamint 152 238, 153 739, 156 964 lajstromszámú magyar szabadalmi leírások). Ezen eljárások a fermentlé feldolgozására nagyon kevés utalást tesznek, vagy a parazita módon növekvő anyarozs feldolgozásánál ismert és szokásos, azoktól csak alig különböző módszereket írnak le, annak ellenére, hogy a feldolgozás szempontjából a fermentlé lényeges tulajdonságokban tér el a korábbi eljárások kiindulási anyagától, az anyarozstól. A szaprofita anyarozs tenyészetek micéliumában az alkaloidokon kívül jelentős színanyag, lipoid, poliszacharid stb. is képződik. A peptid alkaloidok kinyerése a sejtek extrakcióján alapszik, ami az extraktumokban ezen nagy mennyiségű ballasztanyag feldúsulását is eredményezi. Az 1158 380 lajstromszámú angol szabadalmi leírásban ismertetett feldolgozási eljárás alkalmazkodik leginkább a fermentlé tulajdonságaihoz. Ezen eljárás lényege, hogy a fermentlevet megszűrik, a szűrletet és a micéliumot külön-külön extrahálják. A pH 9 értékre állított szűrlet kloroformos extraktumát vákuumban 1/5-ére sűrítik, majd 2%-os 5 vizes borkősav oldattal extrahálják. A borkősavas extraktum pH értékét 9-re állítják, majd újabb kloroformos extrakciót végeznek. A micéliumot 2% borkősavat tartalmazó 50%-os vizes acetonnal keverik, a leszűrt és besűrített extraktum pH 1° értékét 9-re állítják, majd kloroformmal extrahálják. A micélium és a szűrlet kloroformos extraktumait egyesítik és kis térfogatra sűrítik, majd hexánnal kicsapják a nyers alkaloid-bázist, amelyből ismert módszerrel kristályos ergotamin-15 szulfátot állítanak elő. Az anyalúgokat kis térfogatra sűrítik, vízzel hígítják, majd 9,5 pH értéken kloroformmal extrahálják. A kloroformos extraktumot vákuumban 30C°-on kis térfogatra sűrítik és szilikagéllel töltött oszlopon kromatogra-20 falják. A kloroformos elucióval nyert frakció ergokriptint tartalmaz, melyet szárazra párolnak. A maradékot 20-szoros mennyiségű benzolban oldják, majd a térfogatot 1/4-ére sűrítik. A benzolos oldatból kristályosítással ergokriptin bázist nyernek. 25 A szilikagél oszlopot ezután 4% metanolt tartalmazó kloroformmal eluálják, így újabb frakciót nyernek, melynek szárazmaradékából ergotamin-aceton-víz bázis kristályosítható ki. Kiterme-30 lése a megadott példában ergotamin és ergokriptin 164116
