164062. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 11-oxigénezett-15,16-metilén-pregnánok előállítására

3 164062 4 Calonectria decora, Colletotrichum phomoides, Coniothyrium helleborine, Cunninghamella blakesleeana, Curvularia lunata és C. falcata, Fusarium solani és F. bulbigenum, Helicostylum piriforme, Helminthosporium sativum, Mucor hiemalis és M. parasiticus, Neurospora crassa, Nocardia lurida, Pestalotia foedans, Rhizopus arrhizus, Rh. nigricans, Rh. nidulans, Phycomyces blakesleeanus, Streptomyces fradiae, Trichothecium roseum. A mikrobiológiai hidröxilezést pl. a következőképpen végezhetjük el: Ferde agart (összetétel: 10% nyerscukor 100 ml kukoricacsíra-extraktban és 2,2 % agar (Aspergillus ochraceus NRRL 405 törzzsel beoltunk és 5 napon át 28 C°-on inkubáljuk. Ebből a tenyészetből származó spóra-szuszpenáóval 4 x 100 ml terelőlappal ellátott Erlenmeyer-lombikban levő, alábbi összetételű táptalajt oltunk be: 5% glükóz, 2% NZ-amin és 0,15% kukoricalekvár ionmentesített vízben. A glükózt beoltás előtt elválasztjuk és a táptalajt sterilezzük. A pH-t nátriumhidroxiddal 6,5 értékre állítjuk be. A rázatott tenyészetet 36 órán át 28 C°-on inkubáljuk. Kisfermentorban 8 liter — a rázatott tenyészetnél megadottal azonos összetételű — tápoldatot sterilezünk. Beoltás előtt steril körülmények között 400 g glükóznak 1 liter ionmentesített vízzel készített oldatát adjuk hozzá. A kisfermentort a 4 rázatott lombik tartalmával beoltjuk. Az elegyet 36 órán át keverés közben (percenként 400 fordulat) 28 C°-on inkubáljuk és levegőztetjük (6 liter levegő/perc). A habképződést kukoricaolajjal akadályozzuk meg. Ezután 8g 17,21-dihidroxi-15/3,16j3-metilén-pregn-4-én-3,20-dion és 60 ml dimetilformamid oldatát adjuk a tápoldathoz. A fermentáció előrehaladásának ellenőrzése céljából a fermentlé mintáit etilacetáttal extraháljuk és vékonyrétegkromatográfiás úton megelemezzük. A fermentáció kb. 37 óra alatt végetér. A fermentlevet Hyflo-Supercel szűrőanyagon átszűrve a micélium-masszát a fermentációs oldattól elválasztjuk. A micéliumot 6x1 liter vízzel mossuk. A szteroidtartalmú szűrletet és a mosóvizeket azonos térfogatú metilénkloriddal 15 percen át négyszer extraháljuk. Az egyesített extraktokat nátriumszulfát felett szárítjuk és vákuumban 45 C°-on bepároljuk. A maradékot 30-szoros mennyiségű szilikagélen kromatografáljuk. 9:1 arányú éter-metanol-eleggyel 5,9 g tiszta lla,17,21-trihidroxi-15/3,16/3-metilénpregn-4-én-3,20-diont eluálunk. O.p.: 204-205 C° (aceton-izopropiléter-elegyből): (a25 +81°. A (III) általános képletű kiindulási anyagokat tisztán kémiai úton is előállíthatjuk, pl. a B) reakció-séma mutatja a (III) általános képletű vegyületek körébe tartozó (IIP) képletű anyag előállítását. Az (I) általános képletű szteroidok endokrin, különösen gyulladásgátló hatással rendelkeznek. így 5 pl. a llj3,17a,21-trihidroxi-15,16ß-metilen-pregnal,4-dién-3,20-dion 3 mg/kg orális adagban és 11/3,17a21 - trihidroxi-15,16/3-metilén-pregn-4-én-3,20-dion 10 mg/kg szubkután adagban patkányon a „Filz-Pellet" teszt [Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 10 84, 624 (1953)] szerint granulációgátló hatást fejt ki. Eljárásunk további részleteit a példákban ismertetjük anélkül, hogy találmányunkat a példákra korlátoznánk. 1. példa: 6,7 g ll/3,17a-dihidroxi-15/3,16/3-metilén-pregn-4-20 én-3,20-dionnak 50 ml tetrahidrofuránnal és 30 ml metanollal készített oldatához keverés közben 10 g kalciumoxidot adunk. A 0 C°-ra lehűtött elegyhez 1 óra alatt 6,15 g jód, 17 ml tetrahidrofurán, 7 ml metanol és 2,0 ml 50%-os kalciumklorid-oldat 25 elegyét csepegtetjük oly módon, hogy a jód állandóan elhasználódjék. A reakcióelegyet további 4 órán át 0 C°-on keverjük. A reakcióelegyet feldolgozás céljából leszűrjük, a szűrőn levő anyagot metilénkloriddal utánmossuk. A szűrletet 30 jegesvízbe öntjük és metilénkloriddal extraháljuk. Az extraktot nátriumtioszulfát-oldattal és vízzel mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és vákuumban bepároljuk. 9,2 g nyers 21-jodidot kapunk, melyet 200 ml 35 aceton, 60 ml trietilamin és 40 ml ecetsav elegyével 2 órán át visszafolyató hűtő alkalmazása mellett forralunk. Az elegyet jegesvízbe öntjük, metilénkloriddal extraháljuk, az extraktot vízzel mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és vákuumban 40 bepároljuk. 8,1 g nyers 21-acetátot kapunk, melyet 470 ml metanolban oldunk és 2,2 g káliumkarbonátnak 70 ml vízzel képezett oldatával elegyítjük. A reakcióelegyet 1,5 órán át visszafolyató hűtő 45 alkalmazása mellett forraljuk, majd 3,5 ml jégecettel elegyítjük és telített nátriumklorid-oldatba öntjük. Az elegyet metilénkloriddal extraháljuk, vízzel semlegesre mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A maradékot 50 acetonban aktív szénnel kezeljük és aceton-izopropiléter-elegyből átkristályosítjuk. 4,0 g tiszta 1 l(3,17a,21-trihidroxi-15ß,16)3-metilen-pregn-4-en-3,20-diont kapunk. O.p.: 218-221 C°. 2. példa: 6,0 g lla,17a,21-trihidroxi-l 5/3,16/3-metilén-60 pregn-4-én-3,20-diont 200 ml dioxánnal, 4,5 ml ecetsavanhidriddel és 2,0 ml piridinnel 10 órán át 80 C°-on melegítünk. A reakcióelegyet vákuumban szárazra pároljuk és a maradékot szilikagélen kromatografáljuk. 3:1 arányú hexán-aceton-eleggyel 65 4,5 g tiszta lla,17a-dihidroxi-21-acetoxi-15/3,16/3-2