164050. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a D-gyűrűben hidroxil- és keto-csoportot tartalmazó 13béta-rövidszénláncú alkil 3-metoxi-8,14-szeko-gona-1,3,5/10/9/11/-tetraének előállítására
11 164050 12 A pH-t sterilezés előtt 6,5 és 7,0 közé állítjuk. A táptalajhoz használt „nyomelem-oldat" összetétele: CaCl2 1,0 g Co(N03 ) 2 -6H 2 0 10 mg ZnS04 -7H 2 0 88 mg CuS04 -5H 2 0 3,9 mg NiS04 -7H 2 0 1,0 mg Na2 B 4 O 7 -10H 2 O 0,8 mg MnCl2 -4H 2 0 0,72 mg (NH4 ) 6 Mo 7 0 24 -4H 2 0 0,37 mg FeS04 -7H 2 0 1,0 mg desztillált vízzel 1 literre feltöltve A beoltott lombikokat 37 C°-os termosztátszobában 24 órán át rázatjuk. Ezután lombikonként 1 ml etanolban oldott 0,02 g az 1. vagy 3. példa szerint előállított 13j3-metU-3-metoxi-8,14-szeko-gona-l,3,5(lO),9(ll)-tetraén-14Sa,17S0-diolt (Xa) adagolunk és a lombikokat 24 órán keresztül rázatjuk. A lombikok egyesített tartalmát (2500 ml) 2x750 ml metilizobutilketonnal kivonatoljuk. Az egyesített kivonatokat vákuumban szárazra pároljuk. A száraz maradékot 100 ml acetonban oldjuk, 0,25 g semleges alumíniumoxiddal, majd 0,10 g aktív szénnel derítjük és szűrés után vákuumban szárazra pároljuk. Éterből kristályosítva 0,28 g 13j3-metil-3-metoxi-8,14-szeko-gona-l,3,5(10),9(l 1> tetraén-17/3-ol-14-ont (Ha) kapunk. A termék állandói megegyeznek az irodalomban közöltekkel (1493 171 sz. NSzK-beli nyilvánosságrahozatali irat). <-max - 265 nm, e • Elemanalízis Ct 9 tátva: számított: talált: C 75,46% H 8,70%; C 75,37% H 8,72%. 10 15 20 25 30 35 6. példa: A 13/3-metfl-3-metoxi-8,14-szeko-gona-1,3,5(10),9(1 l)-tetraén-17S/3-ol-l 4-on (Ha) előállítása 40 6,0 g 13|3-metil-3-metoxi-8,14-szeko-gonal,3,5(10),9(ll)-tetraén-14,17-diont (la) az 1. példa szerint redukálunk. A 6,1 g száraz maradék három komponensét szintén preparatív rétegkromatográ- 45 fiás úton választjuk szét az 1. példa szerint. A legpolárisabb terméket (1,6 g) diizopropiléterből átkristályosítva a 130-metü-3-metoxi-8,14-szeko-gona-l,3,5(10),9(ll>tetraén- 14Sa,17S0-diol és a 13/3-metil-3-metoxi-8,14-szeko-gona-l,3,5(10),9(l 1> 50 tetraén-14R/3,17Ra-diol (Xa + XIa) mint racemát nyerhető ki. Op.: 116-120 C°; (a)D =0°: Xmav =265 nm, e = 19 900. H26 0 3 -ra (302,4) vonatkoz-55 A polaritásban következő 130-metil-3-metoxi-8,14-szeko-gona-l,3,5(10),9(l 1> tetraén-14R0,17S0-diol (Xlla) a racém transz-diollal (Xa + Xla) szennyezett; éterből végzett többszöri átkristályosítással 0,3 g Xlla nyerhető. A kapott termék megegyezett az 1. példában előállított Xlla-val. 60 65 A legapolárisabb termék metanolból átkristályosítva (0,9 g) azonosnak bizonyult a 3. példában előállított 130-metil-3-metoxi-8,14-szeko-gonal,3,5(10),9(ll)-tetraén- 14Sa,17Ra-diollal (XIHa). Havobacterium dehydrogenans (MNG 73) törzs burgonyás ferdeagar táptalajon növesztett 6-napos tenyészetéből 5 ml 0,4%-os nátriumklorid-oldattal szuszpenziót készítünk, és 1 liter táptalajt oltunk 3-literes Erlenmeyer-lombikban. A táptalaj összetétele: élesztőkivonat (nedves súly) dinátriumhi drogénfoszfát káliumdihi drogénfoszfát 100 g 4,5 g 3,4 g 1 literre töltve csapvízzel. A pH sterilezés előtt 6,2. A beoltott tenyészetet 28 C°-on inkubáljuk 24 órán keresztül malomszita rázógépen (percenként 300 fordulat, 2,5 cm kitérés). A kinőtt tenyészet pH-ját 6,5-re állítjuk és 20 ml etanolban oldott 0,4 g Xa + XIa-t adagolunk. Az inkubálást tovább folytatjuk_a fenti körülmények között. 24 óra után a fermentációs folyadék feldolgozása az 5. példa szerint törtérik. A száraz maradék két komponense az 1. példa szerint preparatív rétegkromatográfiás úton választható szét. Az apolárisabb anyagot éterből kristályosítva 0,14 g 13j3-metil-3-metoxi-8,14-szeko-gona-l,3,5(10),9(l 1> tetraén-17S0-ol-14-on (Ha) nyerhető. A termék állandói megegyeznek az irodalomban közöltekkel (1493 171 sz. NSzK-beli nyilvánosságrahozatali irat). A polárisabb anyagot (0,19 g 130-metil-3-metoxi-8,14-szeko-gona-l,3,5(10),9(ll)- tetraén-14Rj3,17Ra-diol: Xla) "ceton-petroléterből átkristályosítva op.: (119)-1Z7-132 C°; (a)tf = -21,4° (c = 1, etanol)): Xmax = 265, e = 20 200. Elemanalízis C19 H 26 0 3 -ra vonatkoztatva: számított: C 75,46% H 8,70%; talált: C 75,51% H 8,66%. Az átalakítás után visszamaradó Xla a jobbraforgató enantiomerrel (Xa) szennyezett. 7. példa: A 13/3-etil-3-metoxi-8,14-szeko-gonal,3,5(10),9(ll>tetraén-17S|3-ol-14-on (IIb) előállítása. 6,0 g 13|3-etil-3-metoxi-8,14-szeko-gonal,3,5(10),9(ll>tetraén-14,17-diont (Ib) az 1. példa szerint, azonban 5 órán keresztül redukálunk. A 6,2 g száraz maradékot acetonból kristályosítva szennyezett 13|3-etil-3-metoxi-8,14-szeko-gonal,3,5(lO),9(ll>tetoaén-14R0,17S0-diolt (Xllb) kapunk, amely etanolból átkristályosítva (0,6 g) a 2. példában előállított Xllb-vel azonosnak bizonyult. A kristályosítási anyalúg 3 komponense preparatív rétegkromatográfiás úton választható szét az 1. példa szerint. A legpolárisabb termék szobahőmérsékleten olvadék; megismételt preparatív rétegkromatográfiás tisztítás után 1,1 g 130-etil-3-metoxi-6
