163770. lajstromszámú szabadalom • Eljárás metilkobalamin előállítására

163770 5 6 kobalamint adtunk be szubkután úton. Az ivóvízhez 10% etanolt adtunk. Az állatok egy csoportját metilkobalamin helyett összehasonlítás céljából hidroxokobalaminnal kezeltük. A kapott eredményeket az alábbi táblázatban foglaljuk össze: áz anabolikus hatású pegyület napi dózisa: 0 (kontroll) 1 mg/kg metilkobalamin 1 mg/kg hidroxokobalamin Súlygyarapodás: + 64% + 83% + 69% Az eredményekből kitűnik, hogy a metilkobalamin a hidroxokobalaminnal hatásosabban serkenti az anyagcserét. Vizsgálat fehérjeszegény táplálékkal Az állatokat 31 napig tápláltuk fehérjeszegény táplálékkal, amely egyetlen fehérjeforrásként 10% kazeint tartalmazott. Az ivóvízhez egyre növekvő mértékben, éspedig kezdetben 0%, később 5%, atána 10%, végül 15% mennyiségben etanolt adtunk. Az állatoknak naponta adtunk be metilkobalamint szubkután úton. Az eredményeket az alábbi táblázatban foglaljuk össze: Az anabolikus hatású vegyület napi dózisa: 0 (kontroll, alkohol nélkül) 0 (kontroll, alkohollal) 1 mg/kg metilkobalamin 5 mg/kg metilkobalamin + 53% + 44% + 54% + 58% 10 15 Súlygyarapodás: 30 A találmány szerinti eljárással előállított metilkobalamint a szokásos gyógyszerkészítési eljárások alkalmazásával gyógyszerré alakíthatjuk. A találmányt az alábbi példákkal világítjuk meg közelebbről az oltalmi kör korlátozása nélkül. 1. példa 8 g hidroxokobalamint feloldunk 1 liter metanolban és az oldathoz 1,4 g jódot adunk. A keveréket 3 órán át melegítjük 65 C°-on. Az így kapott jódkobalamin oldathoz 50 g metil-higany-jodidot adunk. Az elegyet 3 órán át 65 C° hőmérsékleten tartjuk, azután csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot acetonnal mossuk, szárítjuk és 250 ml vízzel oldjuk. Az oldhatatlan részt kiszűrjük. A vizes oldatot dietilaminoetilcellulózzal töltött oszlopra visszük, majd az eluátumot egy karboximetilcellulózzal töltött oszlopon kromatografáljuk a reagálatlan kiindulási vegyület okozta szennyezések eltávolítása végett. Az oszlopokat vízzel mossuk, a vizes oldatokat egyesítjük és mintegy 180 ml térfogatra betöményítjük. A betöményített oldathoz 1800 ml acetont adunk, és az oldatot egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A kivált csapadékot 35 40 45 50 kiszűrjük és szárítjuk, 1,81 g metilkobalaminhidrátot kapunk. A karboximetilcellulózzal töltött oszlopról 2,87 g kiindulási vegyületet kapunk vissza hidroxokobalamin alakjában. A fentiek szerint előállított metilkobalamin sötétvörös por, vízben és alkoholban jól oldódik, fény hatására bomlik. A fény hatására bekövetkező bomlás során formaldehid képződik, amelyet dinitrofenilhidrazinnal mutathatunk ki. UV-spektrum (pH 7 puffer) Maximumok: 522 nm 342 nm 266 nm 20 Minimumok: 410 nm 367 nm 329 nm Inflexió: 375 nm 25 2. példa ElSn 69,7 106,5 153 26,2 87 91,3 88,2 5 g hidroxokobalamin-hidrátot, amely megfelel 3,9 g vízmentes terméknek, 250 ml vízben oldunk, és az oldathoz 5 g ammónium-metil-hexafluorszilikátot adunk. Ezt a keveréket 2 órán át 50 C° hőmérsékleten tartjuk keverés közben, azután szobahőmérsékletre hűtjük le. A reakcióelegyet 300 ml 1:3 arányú fenol-diklóretán eleggyel extraháljuk. Ezután keverés közben lassan 625 ml acetont, majd 22 ml vizet adunk az oldathoz. A keverést még egy órán át folytatjuk, azután a csapadékot kiszűrjük és csökkentett nyomáson szárítjuk. 4 g nyers metilkobalamint kapunk. A nyers termék 3,5 g-ját 200 ml 1: 1 arányú víz-aceton elegyben oldjuk, azután lassan 900 ml acetont adunk az oldathoz, majd az oldatot egy éjszakán át állni hagyjuk szobahőmérsékleten. A kristályos csapadékot elkülönítjük és csökkentett nyomáson szárítjuk. 3,43 g metilkobalamin hidrátot (víztartalma 3,3%) vagy 3,32 g vízmentes terméket kapunk. A termék minősége és jellemzői azonosak az 1. példa szerint előállított vegyületével. 3. példa 55 100 mg 5'-dezoxi-adenozil-5,6-dimetil-benzimidazol-kobalamint 5 ml vízben oldunk, azután 100 mg ammónium-metil-hexafluoroszilikátot adunk az oldathoz. A keverék hőmérsékletét 2 órán át 50 C°-on 60 tartjuk keverés közben, azután a reakcióelegyet szobahőmérsékletre hűtjük le. Metilkobalamin oldatot kapunk, amelyet az 1. példa szerinti kromatográfiás eljárással tisztítunk. Az 1. példában leírt termékkel azonos végterméket 65 kapunk. 3