163709. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-piroglutamil-L-hisztidil- pirrolidid előállítására

163709 3 oxi-4-oxo-3,4-dihidro-1,2,3-benzotriazin jelenlétében hajtjuk végre. A reakció kezdetén az elegyet —10 C° és 0 C° közötti hőmérsékleten tartjuk, majd a reakciót szobahó'mérsékleten fejezzük be. Egy előnyös eljárásváltozat szerint a (III) képletű amidot dimetilformamid, tetrahidrofurán vagy etilacetát jelenlétében az L-piroglutaminsav reakcióképes észterével, pl. 2,4,5-triklórfenilészterével vagy N-hidroxi-szukcinimidészterével reagáltatjuk. A reakciót előnyösen szobahőmérsékleten vagy enyhén megnövelt hőmérsékleten hajtjuk végre. Az (I) képletű dipeptid-amid elkülönítése és tisztítása céljából az elegyet pl. bázikus ioncserélő gyantaoszlopon, így Amberlite IR—45 vagy IRA—400 gyantaoszlopon szűrjük, a szűrletet bepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük, és a terméket kevés etanolból acetonnal, etilacetáttal vagy éterrel kicsapjuk. Eljárhatunk úgy is, hogy a (III) képletű amidot (II) általános képletű glutaminsav-származékokkal reagáltatjuk. Az Ac helyén benziloxikarbonil-csoportot tartalmazó (II) általános képletű vegyületet pl. a Chem. Ber. 103 (1970) 2041. oldalon ismertetett eljárással állíthatjuk elő. A további (II) általános képletű vegyületek előállítása során a fenti termék benziloxikarbonil-csoportját hidrogénezéssel lehasítjuk, majd a vegyületet terc-butiloxikarbonilaziddal, adamantiloxikarbonilkloriddal vagy izoborniloxikarbonilkloriddal acilezzük. A (II) és (III) képletű vegyületek reakcióját a (III) képletű amid és L-piroglutaminsav reakciójánál ismertetett körülmények között hajtjuk végre. A reakció során kiváló kristályosodási tulajdonságokkal rendelkező, (VI) általános képletű közbenső termékek képződnek. Ez a jelenség nagymértékben megkönnyíti a tisztítást. A közbenső terméket ezután 30—60 percig kb. 10% anizolt tartalmazó trifluorecetsavban forraljuk. Ezalatt a védőcsoportok lehasadnak, és a glutaminil-csoport piroglutamil-csoporttá ciklizálódik. A reakcioelegyet vákuumban szárazra pároljuk, majd a maradékot oldjuk, bázikus ioncserélő gyantán, pl. Amberlite IR—45 vagy IRA—400 gyantán szűrjük, és a szűrletet fagyasztva szárítjuk. Egy további előnyös eljárásváltozat szerint (IV) általános képletű vegyületeket pirrolidinnel kondenzálunk, majd a (VI) általános képletű közbenső terméket (I) képletű vegyületté alakítjuk. A (IV) általános képletű kiindulási anyagokat pl. Ac-Gln-(Mbh)-OH általános képletű vegyület — ahol Ac és Mbh jelentése a fent megadott — és H-His-OMe kondenzációjával, és a dipeptidészter elszappanosításával állíthatjuk elő. A (IV) általános képletű vegyületet oldószerben, pl. dimetilformamidban vagy dimetilacetamidban, diciklohexilkarbodiimid kondenzálószer és aktív észtert képező reagens, pl. N-hidroxi-szukcinimid, 1-hidroxi-benzotriazol vagy 3-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidro-1,2,3-benzotriazin jelenlétében pirrolidinnal reagáltatjuk. A reakció során könnyen tisztítható (VI) általános képletű vegyület képződik, amelyet a fent ismertetett módon alakítunk (I) képletű vegyületté. A kondenzációs reakciót előnyösen —10 C° és 0 C° közötti hőmérsékleten kezdjük, és szobahőmérsékleten fejezzük be. A találmány szerint előállított dipeptid-amid a 4 humán- és állatgyógyászatban a thyroxin-képződéskor végbemenő jódbeépülés mérésén keresztül a hipofízis működés vizsgálatára, továbbá a csökkent pajzsmirigyműködés és következményei, pl. a 5 myxoedema kezelésére használható fel. Az (I) képletű vegyületet a gyógyászatban széles dózistartományban adhatjuk be. Emberen, intravénás beadás esetén már 1—10 mg hatóanyag is észlelhető hatást vált ki. Az (I) képletű vegyületet 10 intravénásán általában 10—50 mg-os dózisban, orálisan 1000 mg-ig terjedő dózisban adhatjuk be. Az utóbbi esetben a vegyület lényegesen hosszabb ideig fejti ki hatását. A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör kőris látozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. 1. példa 20 a)

Z-His-pirrolidid 10,5 g Z-His-azid (Z=benziloxikarbonil-csoport) [Liebigs Ann. 656, 190 (1062)] 100 ml etilacetáttal készített oldatához 0 C°-on 10 ml pirrolidint adunk. Az elegyet 15—20 órán át +4 C°-on tartjuk, majd 25 az elegyhez 200 ml etilacetátot adunk, és a szerves oldatot 100 ml telített vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal mossuk. Az etilacetátos oldatot magnéziumszulfát fölöttszárítjuk és bepároljuk. A maradékot 100 ml 90%-os metanolban felvesszük, és 30 50 ml Amberlite IR—45 ioncserélő gyantán (OH-forma) szűrjük. Az oszlopot 90%-os metanollal mossuk, a szűrletet vákuumban, 30 C°-os fürdőhőmérsékleten szárazra pároljuk, és a maradékot éterrel eldörzsöljük. 9,7 g Z-His-pirrolididet ka-35 punk. Rf

=0,65 (8:2 arányúmetanol:víz elegyben). b) H-His-pirrolidid-acetát 6,9 g Z-His-pirrolididet 100 ml 90%-os ecetsavban palládium katalizátor jelenlétében hidrogéne-40 zünk. Az oldatot bepároljuk, és az olajos maradékot abszolút éterrel eldörzsöljük. 5,1 g H-His-pirrolidid-acetátot kapunk. Az olajos termék kis mintáját éteres sósavoldattal H-His-pirrolidid-acetát-dihidrokloriddá alakítjuk, op.: 242 C°. 45 c) Pyr-His-pirrolidid 2,0 g H-His-pirrolidid-acetátot 30 ml dimetilformamidban szuszpendálunk. A szuszpenzióhoz 3,1 g Pyr-2,4,5-triklórfenilészter [Chem. Soc. C, 1967, 50 108], 25 ml dimetilformamiddal készített oldatát adjuk, és a reakcioelegyet 20 órán át 0 C°-on, vagy éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldószert lepároljuk, és a maradékot éterrel eldörzsölve kristályosítjuk. 4,3 g Pyr-His-pirrolididet kapunk. 55 A terméket etanol és aceton elegyéből átkristályosítjuk. [aJD°=— 22° (c=0,5, 1:1 arányú metanol: : etanol elegyben). 2. példa 60 a)

Z-Gln(Mbh)-His-OMe 16,5 g Z-Gln(Mbh)-OH, [Ber. 103, 2041 (1970)] 7,85 g H-His-OMe.2HCl [J. Biol. C. 223, 935] 8,8 g 1-hidroxi-benzotriazol és 9,0 ml trietilamin 220 ml 65 kloroformmal készített oldatához 0 C°-on 7,2 g di-2