163708. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására 3-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidro-1,2,3-benzotriazin jelenlétében

163708 15 16 a) A racemizáció vizsgálata az egykészülékes eljárásban 2 ml absz. dimetilformamidban, vagy egyéb oldószerben 378,5 mg (1 mmol) Boc-Leu-Phe-OH-t és 5 209,7 mg (1 mmól) H-Val-OBuf.HCl-t oldunk vagy szuszpendálunk. Az elegyhez 0,12 ml (1 mmól) N-etilmorfolint adunk, és jégfürdó'n lehűtjük. Ezután az elegybe juttatjuk az adalékanyagot (N-hidroxi-szukcinimidet vagy 3-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidro- 10 -1,2,3-benzotriazint), és végül 207 mg (1 mmól) DCC 1 ml absz. oldószerrel készített, 0 C°-ra hűtött oldatát mérjük be. Az elegyet 1 órán át 0 C°-on, majd 1 órán át szobahó'mérsékleten állni hagyjuk, zöljük. körülbelül 30 ml etilacetáttal hígítjuk, a kivált csapadékot kiszűrjük, a szűrletet telített nátrmmhidrogénkarbonát-oldattal, 2 n citromsav-oldattal, telített nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk, nátriumszulfát fölött szárítjuk, bepároljuk, és a maradékot etilacetátos oldatban 3 g bázikus alumíniumoxidon (Woelm, I. aktivitási fok) kromatografáljuk. A körülbelül 40 ml eluátumot bepároljuk, a maradékot körülbelül 5 ml 8—9 n metanolos sósav-oldatban oldjuk, és bombacsó'ben 24 órán át 70 C°-on tartjuk. Az oldatot bepároljuk, és a maradékot F. Weygand és mtsai módszerével feldolgozzuk. Az eredményeket az 1. táblázatban kö-1. táblázat Ekvivalens Adalékanyag Oldószer D-Phe-L-Val % 0 — DMF 0 — THF 1 N-hidroxi-szukcinimid DMF 2 N-hidroxi-szukcinimid DMF 1 HOOBT DMF 2 HOOBT DMF 1 HOOBT THF 1 HOOBT dimetilacetamid 1 HOOBT metilénklorid 1 HOOBT DMSO 0 — DMSO 1 HOOBT piridin 0 — piridin 14,3 8,1 1,0 «=1,0 «=1,0 1,3 «=1,0 «=1,0 <=1,0 1,15 14,9 1,5 19,2 b) A racemizáció vizsgálata a diciklohexilkarbodi- 35 imiddel és 3-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidro-l,2,3-benzotriazinnal, illetve N-hidroxi-szukcinimiddel előzetesen aktivált peptidek esetében 2 ml oldószerben 378,5 mg (1 mmól) Boc-Leu- 40 -Phe-OH-t és adalékanyagot (3-hidroxi-4-oxo-3,4--dihidro- 1,2,3-benzotriazint, illetve N-hidroxi-szukcinimidet) oldunk, illetve szuszpendálunk. Az elegyet 0 C°-ra hűtjük, keverés közben 207 mg (1 mmól) DCC 1 ml absz. oldószerrel készített, 0 C° oldatát adjuk hozzá, és 1 órán ás 0 C°-on, majd 1 órán át szobahó'mérsékleten keverjük. Az elegyhez ezután 209,7 g (1 mmól) H-Val-OBut.HCl-t és 0,12 ml (1 mmól) N-etilmorfolint adunk, 1 órán át szobahó'mérsékleten tartjuk vagy keverjük, majd a 12a) példában megadott módon feldolgozzuk. Az eredményeket a 2. táblázatban ismertetjük. 2. táblázat Ekvivalens Adalékanyag Oldószer D-Phe-L-Val % 1 N-hidroxi-szukcinimid DMF 2 N-hidroxi-szukcinimid DMF 1 N-hidroxi-szukcinimid piridin 2 N-hidroxi-szukcinimid piridin 1 HOOBT DMF 1 HOOBT Dimetilacetamid 1 HOOBT THF 1 HOOBT Metilénklorid 1 HOOBT piridin 2,3 1,65 6,1 8,1 = 1,0 :1,0 = 1,0 = 1,0 1,65 A kiindulási Boc-Leu-Phe-OH előállítása 60 38 g fenilalanint 345 ml dioxán és 115 ml 2 n nátriumhidroxid-oldat elegyében oldunk. Az elegyhez 38 g Boc-Leu-OSu-t adunk, és körülbelül 20 órán át szobahó'mérsékleten keverjük. A csapadékot (a 65 fenilalanin fölöslegét) kiszűrjük, és a szűrletet bepároljuk. A maradékot 200 ml etilacetát és 220 ml 2 n citromsav-oldat között megosztjuk. Az etilacetátos fázist 2 n citromsav-oldattal, majd vízzel mossuk, nátriumszulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. A maradékot petroléterrel eldörzsöljük. 39,3 g ter-