163627. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sertésondó mélyhűtéses konzerválására, felmelegítésére és inszeminálásra
1<Ö627 7 dékhez üvegenként két-háromszoros mélyhűtő' hígítót adunk, és azt az ondósejtekkel összekeverjük. Az ilyen módon hígított anyagot üvegben vízfürdőn másfél óra alatt 5 C°-ra hűtjük le hűtőszekrényben. A hígított és lehűtött oldatot C02 szárazjégre csepegtetve mélyhűtjük. A mélyhűtés ideje 5 perc. A golyócskákat átlátszó műanyag tubusokba töltjük és folyékony nitrogénben tároljuk. Amikor az ondót fel kívánjuk használni, annak felmelegítése során egy műanyag tubus teljes tartalmát 50 C°-ra felmelegített inaktiváló oldatba tesszük, és az rázás közben másodpercek alatt felmelegszik és elkeveredik a hígítóval. Ezt követően a felmelegített ondóoldatot az inaktiváló oldattal, mely azonos hőmérsékletű, 100 ml-re feltöltjük. Egy edényben az ondósejt-oldatot a helyszínre szállítjuk. Az inszeminálás során katéteren keresztül először kb. 50 ml aktiválóinaktiváló hígítót juttatunk a cervixbe és az uterusba. Ezt követően vezetjük be az ondósejt-oldatot, majd pedig 20 ml aktiváló oldatot. A találmány szerinti fentiekben leírt előnyös eljárási változat során kapott ondósejt-oldat, — mint már említettük — , 39 C°-nál hosszabb ideig tartható. Ezt a hőmérsékleti értéket az uterusban érjük el, miután a mélyhűtött golyócskákat 50 C° hőmérsékletű "hígítóban felmelegítettük és azt aktiválóinaktiváló hígítóval, melynek hőmérséklete magasabb, mint a felmelegített ondósejt oldat, 100 ml mennyiségre öntjük fel. Megállapítottuk, hogy az ilyen módon előállított ondósejt-oldatok 6, sőt 8 óra után is 50% feletti ondósejt-mozgékonyságúak. A találmány szerinti oldatok alkalmazásával 10—15 malacos ellesi eredményeket értünk el. A találmány szerinti eljárással mélyhűtött ondósejt-golyócskákat is előállítottunk, melyeket az jellemez, hogy nyugalmi állapotba hozott, mobilizálható kandisznó ondósejteket tartalmaz, melyek fagyasztott víztömegbe vannak beágyazva. A víz kis mennyiségű glicerint, nátriumcitrátot, káliumkloridot, etiléndiamintetraecetsavat, nátriumkarbonátot, fehérje tartalmú anyagokat és antibiotikumokat tartalmaz. Ezek a golyócskák tetszés szerinti hosszú ideig tárolhatók folyékony nitrogénben. A megfelelő számú golyócskának 50 C° hőmérsékletű aktiváló-inaktiváló oldattal való felmelegítése után olyan ondósejt-oldatot kapunk, melynek ondósejt-mozgékonysága legalább 50%. Az eljárás során kapott ondósejt-oldat a megtermékenyítéshez szükséges átlagos ondósejtmennyiséget 100 ml kétszer desztillált vízben és kismennyiségű fehérjetartalmú anyag, glukóz, nátriumcitrát, nátriumkarbonát, etiléndiamintetraecetsav, káliumklorid és antibiotikumok kíséretében tartalmazza. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás sertésondó mélyhűtéses konzerválására és felmelegítésére, melynek során az ejakulátumot a levétel után centrifugáljuk, az üledéket hígítjuk, — 180 és — 200 C° közötti hőmérsékletre fagyasztjuk, a kívánt időpontban a mélyfagyasztott anyagot olyan mennyiségű meleg hígítószerhez adjuk, mely biztosítja az uterus teljes átöblítéséhez szükséges ondó-hígítást, mely alkalmas az inszeminálásra, 8 azzal jellemezve, hogy az ejakulátumot a levétel után és a centrifugálás előtt oldat alkalmazásával inaktiváljuk, a centrifugálás után és a mélyhűtés előtt mélyhűtő-hígítószerrel hígítjuk és végül 60— 5 70 C° hőmérsékletű hígító- és/vagy inaktiváló oldatban való felmelegítés után az ondósejteket mobilizáló aktiválóoldatba vezetjük. (Elsőbbség: 1971. július 15.) 10 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az inaktiválást komplexképzőt, továbbá glukózt és pufferanyagot tartalmazó vizes oldat hozzáadásával végezzük. (Elsőbbség: 1971. július 15.) 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a felmelegítést a végleges hígításhoz szükségesnél kisebb mennyiségű hígító hozzáadásával végezzük, és a végleges kon-20 centrációt az ondósejtek mobilizálására alkalmas oldatnak a hígítóoldathoz való adagolásával állítjuk be. (Elsőbbség: 1971. július 15.) 25 4. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az ondósejteket mobilizáló citráttartalmú aktiválóoldatként nátriumsót, káliumsót, glukózt, pufferanyagot és szulfonamidot tartalmazó vizes oldatot 30 alkalmazunk. (Elsőbbség: 1971. július 15.) 5. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy 35 a véghígítást az uterusban hozzuk létre, melynek során a felmelegített eló'hígított ondót vezetjük be, és ezt követően adagoljuk be az ondósejteket mobilizáló aktiváló oldatot. (Elsőbbség: 1971. július 15.) 6. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a centrifugált sperma hígítását a mélyhűtés előtt fruktózt, tojássárgáját, citromsavat, glicerint és 45 pufferanyagot tartalmazó vizes oldatot alkotó mélyhűtő hígítóval végezzük. (Elsőbbség: 1971. július 15.) 50 7. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a mélyhűtést fokozatokban végezzük, és annak során mélyhűtő hígítóba adagolt ondót az első szakaszban 1—1 1/4—1 1/2 óráig 5 C° hőmérsékleten 55 tartjuk, és ezt követően C02 szárazjégre csöpögtetjük. (Elsőbbség: 1971. július 15.) 8. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási 60 módja, azzal jellemezve, hogy az inaktiválást és a mobilizálást ugyanazzal az oldattal végezzük, és a mélyhűtést csak fagyvédő szereket tartalmazó oldat alkalmazásával hajtjuk végre. 65 (Elsőbbség: 1971. december 17.) 4
