163454. lajstromszámú szabadalom • Eljárás prosztaglandin-E2- előállítására
21 163454 22 nol és 0,1 ml 45%-os káliumhidroxid-oldat elegyével eluáljuk őket. 40 °C hőmérsékleten 30 percig hagyjuk állni a kivágott foltokat az oldószerrel, majd az oldatokat centrifugáljuk és spektrofotometriásán, 278 nm-nél meghatározzuk a vizsgált vegyületet. Ugyancsak a fent leírt eljárás szerint választhatók szét alkotórészeikre az 5,6-transz-15/J-PGA2 és 15/?-PGA2 vegyületeket tartalmazó elegyek is. 7. előállítási előírás PGE2 és 5,6-transz-PGE 2 szétválasztása. A PGE2 és 5,6-transz-PGE 2 vegyületek elegyeit a 6. előállítási leírásban leírthoz hasonló módon választjuk szét alkotórészeikre. A PGE2 és 5,6-transz-PGE 2 elegyét a 6. előállítási előírásban leírt oszlopra visszük; „3A" alkohollal eluálunk és a kapott frakciókat megvizsgáljuk 5,6-transz-PGE2 (ez a gyorsabban eluálódó vegyület), illetőleg PGE2 tartalmukra; ez a vizsgálat ugyanolyan vékonyréteg-kromatográfiai módszerrel történhet, mint fentebb a PGA2 -típusú vegyületek esetében. Az említett oldószer-rendszerben a PGE2 R r értéke 0,13, az 5,6--transz-PGE2 R f -értéke pedig 0,17. A megfelelő egyesített frakciókat betöményítjük, vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk; ily módon elkülönítve kapjuk a fenti két vegyületet. 8. előállítási előírás 15-acetoxi-PGA2 -metilészter elválasztása a 15-acetoxi-5,6-transz-PGA2 -metilésztertől. A 15-acetoxi-PGA2 -metilészter és 15-acetoxi-5,6--transz-PGA2 -metilészter 85: 15 arányú elegyét tartalmazó 11,0 g anyagot 415 ml 15: 5: 0,4 arányú metanolvíz-ecetsav elegyben oldott 6,1 g higany(II)acetáttal elegyítjük és az elegyet 25 °C körüli hőmérsékleten 30 percig állni hagyjuk. Ezután 250 ml vizet adunk hozzá és 700—700 ml hexánnal (Skellysolve B) kétszer extraháljuk. A szerves oldószeres fázist elkülönítjük, a két kivonatot egyesítjük és 100 ml 60%-os metanollal mossuk, majd vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk és bepároljuk; 4,35 g olajszerű maradékot kapunk, amely nagy mennyiségi arányban tartalmazza a 15-acetoxi-5,6-transz-PGA2 -metilésztert. A vizes metanolos fázist 32 ml 6 n sósavoldattal megsavanyítjuk és 700—700 ml hexánnal (Skellysolve B) kétszer extraháljuk. A szerves oldószeres kivonatokat egyesítjük, vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk és bepároljuk; 5,53 g olajszerű maradékot kapunk. Ezt az utóbbi terméket még egyszer alávetjük a fent leírt eljárásnak, 350 ml metanol-víz-ecetsav elegyet és 4,6 g higany(II)acetátot alkalmazva. A vizes metanolos fázisból a fent leírt módon történő feldolgozás útján 3,92 g mennyiségben kapjuk a 15-acetoxi-PGA2 -metilésztert, amely csak csekély mennyiségű 5,6-transz-vegyülettel van szennyezve. A fent leírt eljárással egyező módon különíthetjük el a 15-acetoxi- 5,6-transz-15/?-PGA2 -metilésztert a 15-acetoxi-15 /3-PG A2 -metilésztertől. A PGE2 előállítási eljárásának egyes lépéseit a következő példák szemléltetik közelebbről: 1. példa PGE2 és ll/3-PGE 2 . 250 mg PGA2 4 ml tetrahidrofuránnal készített olda-5 tához 0 °C hőmérsékleten, nitrogén-légkörben 1 ml hexametil-diszilazánt és 0,2 ml trimetil-klórszilánt adunk. Az elegyet 5 °C hőmérsékleten 15 óra hosszat állni hagyjuk, majd csökkentett nyomáson bepáröljuk. Maradékként a PGA2 15-szililéterét kapjuk, amelynek 10 Rf -értéke 0,69 (szilikagélen, az A— IX oldószer-rendszerrel). A fenti módon kapott szililezett közbenső terméket toluolban történő oldás, az oldat bepárlása, e művelet újabb adag toluollal történő megismétlése után 6 ml 15 metanolban oldjuk, az oldatot lehűtjük — 20 °C hőmérsékletre és 0,45 ml, 30%-os, vizes hidrogénperoxidot adunk hozzá. Ezután 0,9 ml n nátriumhidrpxid-oldatot csepegtetünk hozzá keverés közben, — 20 °C hőmérsékleten. Az elegyet 2 óra hosszat — 20 C C hőmérsékleten 20 tartjuk, majd 0,3 ml n nátriumhidroxid-oldatot adunk hozzá ugyanezen a hőmérsékleten, keverés közben. Az elegyet még egy óra hosszat — 10 és — 20 °C között tartjuk, majd újabb 0,1 ml n nátriumhidroxid-oldatot adunk hozzá. Ezután 1,5 ml n sósavoldatot adunk 25 az elegyhez és csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot etilacetáttal extraháljuk, az etilacetátos kivonatot n sósavoldattal, majd sóoldattal mossák, vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk és bepároljuk, A maradékként kapott epoxid R£ -értéke 0,43 (szilika-30 gélen, az A—IX oldószer-rendszerrel). A kapott nyers epoxidot 5 ml dietiléterben oldjuk. A kapott oldathoz 0,5 ml metanolt és 0,1 ml vizet adunk. Ezután 0,5 g fém-alumíniumból készített amalgámozott 35 alumíniumot adunk kis részletekben, 3 óra alatt, a 25 °G hőmérsékleten tartott elegyhez, majd etilacetátot és 3 rr sósavoldatot adunk hozzá, az etilacetátos rétegét elkü* lönítjük, n sósavoldattal, majd sóoldattal mossuk, vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk és bepároljuk. A ma-r 40 radékot 50 g, savval mosott szilikagélen kromatografáljuk; először 50%-tól 100%-ig menő mennyiségű etilacetátot tartalmazó hexán (Skellysolve B) 400 mijével, majd 100 ml 5 % metanolt tartalmazó etilacetáttal eluálunk és 25 ml-es frakciókat fogunk fel. A 9. és 10. [45 frakciót egyesítjük és bepároljuk; ebből 18 mg 11/á-PGE2 vegyületet kapunk. A 17—25. frakciót is egyesítjük és bepároljuk, ebből 39 mg PGE2 vegyületet kapunk, amelynek Rf -értéke 0,2 (szilikagélen, A— IX oldószer-rendszerben). A termék magmágneses rezo-50 nancia-szinképe, infravörös színképe és tömegspektruma megegyezik az ismert módon előállított PGE jellemző adataival. A fenti eljárásban felhasznált amalgámozott alumí-55 nium előállítása a következő módon történik: 50 g higany(II)klorid 2 liter vízzel készített oldatához 50 g szemcsés fém-alumíniumot adunk. A keverékét a hidrogéngáz-fejlődés megélénküléséig (ami kb. 30 mp múlva következik be) rázogatjuk. A reakció megindu-60 lása után a vizes oldat túlnyomó részét dekantáljuk, a maradékot pedig gyors szűréssel eltávolítjuk. Az így kapott amalgámozott alumíniumot 200—200 ml metanollal kétszer, majd 200—200 ml vízmentes dietiléteríel gyorsan mossuk. Ezután az amalgámozott alumíniumot 65 felhasználásig vízmentes dietiléter alatt tartjuk. 11
