163419. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy antibiotikum előállítására
11 163419 12 kukoricalekvárt és csapvizet tartalmazó táptalajt készítünk, és azt 120 c C-on 20 percig sterilizáljuk. A táptalaj pH-ja 7,0. Harminc 500 ml-es Erlenmeyer-lombikba betoltunk 100—100 ml-t a frissen készült steril táptalajból, aszeptikusán beoltjuk az előbb leírt módon készült 5—5 ml oltóanyaggal, és forgó rázógépen 30 °C-on fermentáljuk. A fermentlének fermentálás közben rendszeres időközökben meghatározzuk az antibiotikus hatását a következő módszerrel: 5 ml fermentlevet 5 ml metanollal keverünk, és a keveréket centrifugáljuk. A folyadékrész biológiai hatását Vízzel való kellő hígítás után összehasonlítjuk a tiszta antibiotikum ismert koncentrációjú oldatának biológiai hatásával agar-diffúziós módszerrel, Bacillus cereus D166-ot használva vizsgálati mikroorganizmusként. Fermentálás után egyesítjük a 30 lombik tartalmát, és így összesen 150—200 mg antibiotikumot tartalmazó fermentlevet kapunk. Ehhez 2% kovaföldet adunk a szűrés elősegítésére; és leszűrjük. A szüredéket 8 n kénsavval megsavanyítjuk 6,0 pH-értékig, térfogata Vs-ének megfelelő térfogatú metilizobutilketonnal extraháljuk, és a képződött emulziót Hyflo Supercel szűrést elősegítő anyaggal megtörjük. A szerves folyadékokat egyesítjük, és csökkentett nyomáson mintegy 10 ml-re koncentráljuk. A koncentrátumot részletekben hozzáadjuk 50 ml petroléterhez (fp. 40—60 °C), a kivált csapadékot D3 zsugorított üvegszűrőre gyűjtjük, friss petroléterrel mossuk és megszárítjuk. Mintegy 100 mg sárga port kapunk. 2. példa Literenként 20 g malátapépet, 10 g élesztőkivonatot és 5 g kukoricalekvárt tartalmazó 2000 liter táptalajt beoltunk 100 liter fent leírt módon készült oltóanyaggal, és levegőztetés közben 28—32 °C-on fermentáljuk. Az antibiotikumtermelést a közölt módon ellenőrizzük. Fermentálás után a táptalajt 2% kovafölddel keverjük, majd szűrjük. A szüredéket 8 n kénsawal megsavanyítjuk 6,0 pH-ig, térfogatának 1/5-ét kitevő metilizobutilketonnal kétszer extraháljuk, és a keletkezett emulziót Hyflo Supercel szűrést elősegítő szerrel kezeljük. A szerves folyadékokat összekeverjük, és csökkentett nyomáson forgó bepárlóban körülbelül 1 literre bepároljuk. A keletkezett sűrítményt lassan hozzáadjuk 5 liter petroléterhez (fp. 40—60 °C), a keletkezett csapadékot D 3 üvegszűrőn leszűrjük, friss petroléterrel mossuk és szárítjuk. Átlagos kitermelésként 78 g sárga színű port kapunk. A nyers antibiotikumból 2 g-ot (sav-alakban) megoszlásos kromatografálással tisztítunk. A használt áUófázis 0,1 mól Na2 C0 3 /Na HC0 3 pufferrel 11 pH-nál itatott Hyflo, a mozgófázis petroléter és butilacetát keveréke. A 0,828 g kitermeléssel kapott tisztított antibiotikum fizikai-kémiai tulajdonságai megegyeztek a fent közöltekkel. Bizonyos mennyiségű antibiotikumot vízben oldunk, 0,1 n nátriumhidroxid hozzáadásával 9 pH érték eléréséig, és telített oldat keletkezéséig. Az oldatot szűrjük, butanol hozzáadásával azeotrop-desztilláljuk, és a butanolos maradékot kis mennyiségű vízmentes butanolban gyűjtjük (vákuumban körülbelül 45 °C-on). Az oldathoz keverés közben cseppenként petrolétert adunk, amíg az összes só ki nem vált. A csapadékot szűrjük, mossuk és szárítjuk, így az antibiotikum nátriumsójához jutunk. 5 A találmány értelmében az antibiotikumnak vagy egy sójának, például nátriumsójának jelentékeny mennyiségével kiegészített állati takarmányt készítettünk, különösen szarvasmarhák, disznók, szárnyasok táplálására 10 alkalmas alakban. Az antibiotikum vagy annak sója bármely olyan iners, gyógyászatilag elviselhető vivőanyagban vagy hígítószerben diszpergálható vagy azzal elkeverhető, amely 15 az állatnak orálisan beadható, az antibiotikummal nem reagál, és az állat számára orális adagolásban ártalmatlan. Az antibiotikum vagy sója a takarmányba, vivőanyagba vagy hígítószerbe hagyományos módszerekkel, például őrléssel, kavarással, dobban görgetéssel dolgoz-20 ható be. Az állati takarmány egyéb alkotórészeivel összekeverhető, antibiotikumot tartalmazó koncentrátumok és adalékok előállítása szintén tárgya a találmánynak. A kellő növekedést elősegítő hatás elérésére alkalmas állati takarmányban levő antibiotikumnak vagy 25 sójának mennyisége általában a takarmány súlyára vonatkoztatva 5—20 mg/kg lehet. A következő példa az antibiotikum növekedést elősegítő hatását szemlélteti. 30 3. példa Az antibiotikumot a 2. példában kapott nátriumsó alakjában a vágásra tenyésztett csirkék eleségének egyik 35 alkotórészébe (búzalisztbe) keverjük. Az 5. táblázat a 3, 5 és 7 hetes csirkék súlyát és az eleségben levő antibiotikum mennyiségét tünteti fel. 40 5. táblázat Életkor 3 hét, % 5 hét, % 7 hét, % Kontroll 100 100 100 5 mg/kg 104 103 103 10 mg/kg 107 105 104 20 mg/kg 109 107 105 Az 5. táblázat azt mutatja, hogy az antibiotikum adagolásával a csirkék növekedése fokozható. A csirkéknél az eleség hasznosítása 7 hét alatt 3—5%-kal 55 javul, amikor az eleség 5—20 mg/kg antibiotikumot tartalmaz. 4. példa 60 Az 1. példában kapott antibiotikum nátriumsót az eleség egyik alkotórészével (búzaliszttel) keverten disznóknak adjuk. Az eleségben levő antibiotikum mennyiségét (a tápanyag súlyára vonatkoztatva) a 6. táblázatban közöljük a disznók 6 hét, illetőleg 12 hét utáni átlagos 65 viszonylagos súlyával együtt. 6
