163222. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tejoltó enzim előállítására
3 hogy a rendelkezésünkre álló 6'50-féle baktériumtenyészetből a Bacillus subtilis 117 izolált törzs által termelt termék az eddig alkalmazott törzsekkel előállított termékhez képest előnyösebb tulajdonságokat, magas tejalvasztó képes- 5 séget és alacsony proteolitikus aktivitást mutat Ennek a törzsnek egyik UV^mutánsa a Bacillus subtilis 11 7:212 további előnyös tulajdonsága öszszehasonlítva az általunk ismert gomba- vagy baktériumtörzsekkel szemben, hogy a kinyert 10 termék 2—5-ször magasabb tejalvasztó aktivitást mutat, a proteolitikus aktivitása pedig egytizedére csökken. Kísérleteink során arra a felismerésre jutottunk, hogy az általunk izolált Bacillus subtilis 15 11 722 törzs sovány tejen történő tenyésztés után liofilizálva és 30 °C-on komplex táptalajon tovább tenyésztve, a fermentlevet gélképzéssel baktériummentesítve, majd ammóniumszulfátos kicsapás, szűrés, szárítás után olyan előnyös tu- 20 lajdonságú enzimpreparátumot kaptunk, melynek a tejalvasztó aktivitása magas, a proteolitikus aktivitása pedig alacsony volt. A Bacillus subtilis 11 722 törzs második generációját az Országos Közegészségügyi Intézet 25 Mikroorganizmusok Nemzeti Gyűjteményébe 62. szám alatt letétbe helyeztük. 1. példa 30 B. subtilis 11 722-es törzsünkből vattadugóval lezárt 500 ml Erlenmeyer-lombikban 80 ml sterilizált sovány tej táptalajban 30 °C-on 24 órás rázatással (240 ford./perc/0 46 mm) tenyészetet készítettünk. Az így nyert tenyészethez 5 g ste- 35 ril hántolt árpát adtunk, majd a tenyészetet és a hántolt árpa keverékét, ahol a hántolt árpa a tenyészet nagy részét felszívta, steril körülmények között liofilizáltuk. A hántolt árpára liofilizált tenyészetet — mely egyébként 5 hónapig 40 tárolható — 2 rn3 -es vasfermentorban elkészített 1000 liter 1,0 % tejsavóport 0,1 % kazeint 1,2 % földimogyorólisztet 1,0 % szójalisztet 0,05% ammonszulfátot 0,01% káliumdihidrogénfoszfátot 0,01% magnéziumszulfátot 50 tartalmazó 6,5 pH-jú steril táptalajba oltottuk. A tenyészetet 48 órán át inokulummá növesztettük. A fenti inokulumtenyészet 10%-át a fentivel megegyező táptalajba oltottuk, majd 28 órán át 55 A feladásért fetel: a Közgazdasági 4 növesztettük mind a fermentáció első, inokulum fázisát, mind a fermentáció második, termelő fázisát 30 °C-on tartottuk 1 : 0,5 levegőztetés, és 1,8 szulfitértéket biztosító kevertetés mellett. A fenti módon nyert fermentléhez 0,55% kalciumkloridot és 0,88% dinátriumhidrogénfoszfátot adtunk, a pH-t 7,0-ra állítottuk, majd szűrtük a szuszpenziót. A baktériummentes szűrt levet +5 °C-ra hűtöttük, pH-ját 6,3-ra állítottuk, az enzimet 52% ammóniumszulfát segítségével kisóztuk, a leváló enzimet szűrtük, acetonnal átmostuk a csapadékot és megszárítottuk. A fenti eljárással 1,0 m3 fermentléből 5,5 kg terméket állítottunk elő, melynek aktivitása 79 000 RU/g volt.* [Mérési módszer Vámosné Vigyázó Lilly, Élelmiszertudomány 3 13—23 (1969). * Az így nyert aktivitás azt jelenti, hogy az enzim egységnyi mennyisége hány rész sovány tejet alvaszt meg 20 perc alatt 35 °C-on, pH: 6,0.] 2. példa A táptalaj és tenyésztési feltételek azonosak az 1. példában leírtakkal. A fermentlé pH-ját 5,0-ra állítottuk és centrifugálással eltávolítottuk a baktériumtesteket. A baktériummentes szűrt lé pH-ját 6,0-ra állítottuk, majd a szűrt levet vákuumban 1/10-ére bepároltuk. A besűrített levet szűrtük és a pH-t 6,0-ra visszaállítottuk, majd 42% ammóniumszulfáttal kisóztuk az enzimet. A nedves enzim csapadékot acetonnal mostuk és szárítottuk. 1,0 m3 fermentléből 6,0 kg terméket állítottunk elő, amelynek aktivitása 56 000 RU/g volt. Szabadalmi igénypont 1. Eljárás tej oltó enzim előállítására azzal j e 1-1 e m e z v e, hogy a Bacillus subtilis 11722 00062 OKI deponálási számú törzset sovány tejen tenyésztjük, majd liofilizáljuk, és a liofilizátum segítségével a bioszintézist 30 °C-on tej savóport, kazeint, földimogyorólisztet, szójalisztet, ammóniumszulfátot, káliumdihidrogénfoszfátot, magnéziumszulfátot tartalmazó 6,5 pH-jú steril táptalajon süllyesztett kultúrában végezzük, majd a gélképzéssel baktériummentesre szűrt fermentléből vagy a fermentlé sűrítményéből 6,0—6,3 értéken 42,—52% ammóniumszulfát alkalmazásával a szűrlet fehérjetartalmát kisózzuk, a kivált enzimkomplexet szűrjük, majd megszárítjuk. is Jogi Könyvkiadó Igaz gatója. Győr-Sopron megyei NyomdaváMalat, Győr 75.OT86
