163221. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-aminocefalosporánsav előállítására
163221 13 14 hozzá (pH = 1,6). A hőmérsékletet jégfürdőn 0 és +5 °C között tartjuk. A hidrolíziselegyhez 5 g ammóniumkarbonát 10 ml vizes oldatát adjuk (pH = 3). Ezután a pH-t 3 ml ammóniumhidroxiddal pH = 3,8-ra állítjuk. A kristályosodó elegyet két órán át jégfürdőn keverjük, majd egy éjszakán át (16 óráig) jégen tartjuk. A kristályokat leszűrjük, metilénkloriddal, 20 ml vízzel, 50 ml metanollal és acetonnal mossuk. A kristályokat szárítjuk. Termelés 3,72 g (50,2%). 7. példa Az N-karbobenziloxi-cefalosporin C nátriumsó „in situ" előállítása: Az 1. példa szerinti eljárásban az 5,9 : 1 halogénhangyasav-izobutilészter : cefalosporin C mólarányt 8,0 : 1 karbobenziloxiklorid : cefalosporin C mólaránnyal helyettesítve N-karbobenziloxi-cefalosporin C nátriumsót állítunk elő. Kitermelés: az eredeti aktivitás kb. 45%-a. 8. példa 7-ACA előállítása N-karbobenziloxi-cefalosporin C nátriumsóból: A 6. példa szerinti eljárást ismételjük meg azzal a különbséggel, hogy az ott alkalmazott N-karbetoxi-cefalosporin C nátriumsó helyett egyenértéknyi mennyiségű N-karbobenziloxi-cefalosporin C nátriumsót használva állítunk elő 7-ACA-t. 9. példa Az N-karbobutilamino-cefalosporin C „in situ" előállítása (VII képlet): 2900 liter, cefalosporin C tartalmú teljes fermentlevet, 108 kg szűrősegédanyaggal és 300 ml szilikon-habzásgátlóval keverünk, majd 10 "C-on pH 6,9 mellett szűrjük. Ezután a szűrt fermentlé pH-ját oxálsavval 3,l-re állítjuk be, majd 30%-os kénsav hozzáadásával pH = 2-re. 54 kg friss szűrősegédanyagot adunk hozzá, és az elegyet leszűrjük. Az így kapott szűrletet fele mennyiségű metilizobutilketonnal (MIBK) extraháljuk pH 2 értéken, majd elválasztjuk és a MIBK-fázist eldobjuk. Az extrahált fermentléhez negyedrész menynyiségű acetont adunk és a pH-t nátriumhidroxid-oldattal pH = 7,85 értékre állítjuk be. 100 mliter fermentiere számítva 2 kg n-butilizocianátot adunk az oldathoz lassan, keverés közben (kb. 6,1 mól n-butilizocianát per mól cefalosporin C arányban). A pH-t 15'%-os nátriumhidroxid-oldattal állandóan 7,8 és 8,0 között tartjuk, és a hőmérséklet 0—10 °C között van az adagolás közben. A keverést addig folytatjuk, amíg a pH nátriumhidroxid hozzáadása nélkül is állandó marad, ami kb. 2 óra múlva következik be. 30%-os kénsav adagolásával a pH-t 2-re állítjuk be, és az acilezett fermentlevet térfogata 3//, részének megfelelő n-butanollal extraháljuk. A butanolos fázist vízzel mossuk, majd vákuumban 36 °C-on eredeti térfogatának kb. felére koncentráljuk be. A koncentrátum víztartalma elhanyagolható. A koncentrátumot lehűtjük, és pH = 4,8-ig n-5 -butanolos nátriumetilhexanoát-oldatot adunk hozzá. Az N-karbobutilamino-cefalosporin C nátriumsója kicsapódik és ezt szűréssel elválasztjuk. A csapadékot butanollal mossuk, petroléterben újraszuszpendáljuk, acetonnal mossuk, szűrjük 10 és vákuumszekrényben 40—60 °C-on szárítva nyerjük a terméket. A használt fermentlé vizsgálata során 15%-nál kevesebb cefalosporin C aktivitás mutatható ki. A termék megfelelő tisztaságú a 7-ACA előállítás céljára. A termék ket-15 tős savnak mutatkozik. Analízis: C21H30N4O9S . HaO-ra vonatkoztatva: számított: C=47,36%; H=6,06%; N= 10,94%; H2 0=3,38%; 20 talált: C=47,85%; H=6,52%; N=10,54%; S=6,45%; H2 0=3l > 48í ) /o. 25 55 10. példa 7-amino-cefalosporánsav előállítása: 13,4 g N-karbobutilamino-cefalosporin C nátriumsót, 45 ml metilénkloridot, 1,0 ml dimetilanilint és 3,67 ml trietilamint összekeverünk egy-30 mással. Keverés közben 25—28 °C-on 5,0 ml diklórdimetilszüánt adunk az elegyhez. Az oldatot 30 percig keverjük, majd •—60 °C-ra hűtjük és 11,5 g foszforpentaklorid 100 ml metilénkloridos oldalát adjuk hozzá, miközben a reakció hőmér-35 sékletét —40 °C alatt tartjuk. Ehhez további 12,4 ml N,N-dimetilanilin 10 ml metilénkloriddal elkészített oldatát adjuk. A hőmérsékletet 2 órán át —40 C C alatt tartjuk, majd —73 °C-ra csökkentjük és 60 ml metanol és 2,5 ml dimetilanilin 40 —78 °C-ra hűtött elegyét adjuk hozzá lassan. A hőmérséklet eközben —47 °C-ra emelkedik. Az elegyet keverjük, és —50 °C-ra hűtjük vissza. Két óra elteltével 55 ml 95 °C-os vizet adunk hozzá, miáltal a hőmérséklet -f-5 °C-ra emelkedik. Az 45 elegyet jégfürdőn hűtjük, és 4 percig keverjük. A pH értéke 0,I-nél kisebb. 8 perc alatt pH 3,8-ig 21,5 ml ammóniumhidroxidot adunk hozzá, majd néhány órás keverés után leszűrjük. A csapadékot összegyűjtjük, 25 ml metilénkloriddal, 50 ezután 25 ml vízzel, majd 50 ml metanollal, végül 50 ml acetonnal mossuk. Az anyagot szárítva 4,05 g 93,7%-os 7-ACA keletkezik. 11. példa Az N-karbofenilamino-cefalosporin C nátriumsójának „in situ" előállítása: A 9. példa szerinti eljárást ismételjük meg azzal a különbséggel, hogy az ott használt n-butil-60 izocianát : cefalosporin C 6,1 : 1 mólarány helyett 7i : 1 fenilizocianát mólarányt használva, 7--ACA-vá hasításra alkalmas termék keletkezik, melynek tisztasága kb. 38—42%. Az extrakcló után használt fermentlé vizsgálata 15%-nál ki-63 sebb cefalosporin C aktivitást mutat. A termé-
