163172. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a sertés szekretin-D-hisztidinanalógjának előállítására
163172 való előállítása során az aminofunkciók megvédhetek a szokásos védőcsoportokkal, amilyenek a benziloxikarbonil-, nitrobenziloxikarbonü-, metoxibenziloxikarbonil-, terc-butiloxikarboml. ftalil, o-nitrofenilszulfenil-, tozil- stb. csoportok. 5 A karboxilcsoportok védelmére metil-, etil-, terc-butil-, benzil-, nitrobenzil-, trimetilbenzil- stb. csoportok alkalmasak. A hidroxil-csoportot védő csoportok lehetnek benzil-, terc-butil-, tetrahidropiranil- stb. csoport és a guanidino-csoportot 10 védő csoportok lehetnek nitro-, tozil-, p-nitrobenziloxikarbonil- stb. csoport, vagy protonozás alkalmazható a védelemre. A védőcsoportok ismert reakciókkal távolíthatók el, pl. nátriummal cseppfolyós ammóniában végzett redukcióval, hidrogénezéssel (pl. palládiumszén katalizátor jelenlétében), hidrogénhalogeniddel (pl. hidrogénbromiddal vagy sósavval) -\»aló ^kezeléssel ecetsavban vagy trifluorecetsav- ^ val. A szabad aminők előállítására egy hidrogénhalogeniddel ecetsavban való kezelés után a hidrohalogenidet vagy ioncserélő gyantával, például AmlSerlite IR400-zal, kezeljük, vagy egy 23 aminnal, például trietilaminnal, közömbösítjük. A fent említett peptidsók például hidrokloridok, hidrobromidok, acetátok, fluoracetátok, mint a trifluoracetát, és klóracetátok, mint a diklóracetátok, mint a diklóracetát, lehetnek. 30 A találmány szerinti eljárással előállítható új sertésszekretin-analóg képlete: D-His-L-Ser-L-Asp-Gly-L-Thr-L-Phe-L-Thr-12 3 4 5 6 7 35 -L-Ser-L-Glu-L-Leu-L-Ser-L-Arg-L-Leu-8 9 10 11 12 13 -L-Arg-L-Asp-L-Ser-L-Ala-L-Arg-L-Leu-14' 15 16 17 18 19 40 -L-Glu(NH2 )-L-Arg-L-Leu-L-Leu-L-Glu(NH 2 >-20 21 22 23 24 -Gly-L-Leu-L-Val-NH2 . 25 26 27 45 A találmány szerint előállított sertésszekretin-analóg a sertésszekretinhez és hasonlóan csökkenti a g.yomorsav-kiválasztást, ezért felhasználható a gyomorban és a nyombélben létrejövő savtúltengés megszüntetésére. A betegnek beadva a bevezetőben kifejtett okokból mintegy kétszer annyi ideig hatásos, mint a csak L-aminosavakból felépített sertésszekretin. A technika állását e téren M. A. Ondettinek és munkatársainak a sertésszekretin szintéziséről írt közleménye (a „Pharmacology of Hormonal Polypeptides and Proteins" című mű 18—30. oldalain — Plenum Press, New York 1968) ismerteti a szintézis egyes lépéseinek és a peptid- g^ fragmensek biológiai hatásosságának leírásával és a. tárgykör irodalmának bő felsorolásával. A szertésszekretin D-hisztidin-analógjának a találmány szerinti előállítását a következő példa saemlélteti. 65 50 SS Példa Benziloxikarbonil-D-hisztidü-O-benzil-L-szeril--ß-benzü-L-aszparagil-glicil-L-treonü-L-fenilalanil-L-treonü-O-benzil-y-benzü-L-szeril-ß-benzil-L-glutamil-L-leucil-O-benzü-L-szeril-mtro^L-arginü-L-leucil-nitro-L-arginil-ß--benzü-L-aszparagil-O-benzil-L-szeril-L-alanü-nitro-L-arginü-L-leucil-L-glu1ximinÍl-nitro--L-arginü-L-leucil-L-leucü-L~glutaminil-glicil--L-leucil-L-valinatmid előállítása 305 mg (1 mmól) benziloxikarbonil-D-hisztidin-hidrazidnak 4 ml etilacetát és 3 ml n sósav keverékével készült oldatához sós jégfürdőiben való keverés közben hozzáadunk 70 mg (1 mmól) nátriumnitritet. Három perccel később hozzáadunk 0,8 ml 50%-os káliumkarbonát-oldatot, további 3 perc múlva abbahagyjuk a keverést, és a két fázist különválni hagyjuk. A vizes fázist további 1 ml etilacetát hozzáadásával extrahéljuk, majd kiontjuk. Az egyesített szerves fázisokat 0 °C-on magnéziumszulfáton szárítjuk. Az így kapott 3,5 ml etilacetátos benziloxikarbonil-D-hisztidinazid-oldatot hozzáadjuk 780 ml megfelelő hexakozapeptid-trifluoracetátnak 6 ml dimetilformamid és 0,4 ml 14%-os dimetilformamidos trietilamin-oldat elegyével készült jéghideg oldatához. A reakciókeveréket 24 óra hosszat 5 °C-on tartjuk, majd további adag benziloxikarbonil-D-hisztidinazidot (az első mennyiség harmadrészét) adunk hozzá. Ujabb 24 óra elteltével a reakciókeveréket 500 ml etilacetátba csepegtetjük. A kivált szilárd anyagot szűréssel elválasztjuk, etilacetáttal mossuk, és vákuumban nátriumhidroxid fölött megszárítjuk. Kitermelés 717 g. A termék 135 °C-on lágyul, 225 °C-on megsötétedik, és 310 °C-on bomlik. 25 MD =—10,8 (c=l%, ecetsavban). D-Hisztidil-L-szerü-L-aszparagil-glicil-L-treonil-L-fenüalanil-L-treonil-L-szeril-L-glutamü-L-leucil-L-szeril-L-arginil-L-leucil-L-arginil-L-aszparagü-L-szeril-L-alanü-L-arginil-L-leucü-L-glutaminil-L-arginil-L-leucil-L-leucil-L-glutaminil-glicil-L-leucil-L-válinamid Az előbb leírt módon előállított védett heptakozapeptidből 500 mg-ot feloldunk 50 ml 80%-os vizes ecetsavban, az oldathoz hozzáadunk 400 mg 5% palládiumot tartalmazó palládium-báriumszulfát katalizátort, és a keveréket 48 óra hoszszat szobahőmérsékleten hidrogénezzük. Utána a katalizátort percenként 1500 fordulattal való centrifugálással eltávolítjuk, és az oldatot liofilizáljuik. Kitermelés 444 mg. A termék megoszlási állandója n-^butanolfoszfát puffer rendszerben (7 pH) K = 0,62. Aminosav-összetétele (mólarányok): 1,91 aszparaginsav, 1,80 treonin, 3,4 szerin, 2,94 glutaminsav, 2,06 glicin, 1,02 alanin, 1,14 valin, 6,2 leucin, 1,0 fenilalanin, 0,91 hisztidin, 3,97 arginin.
