163083. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nukleozid-diofoszfátészterek előállítására
7 163083 4. példa: Citidinfoszfát-kolin (CDP-kolin) 2 g citidin-foszforsiavat 1,5 ml morfolin hoz- 5 záadása mellett 100 ml tiszta m etilalkoholban oldunk és az elegyet 2 g diciklohexil-karbodisLmid hozzáadása után 50 C°-ra melegítjük. A fenti reakcióelegyhez 5 g kolinfoszfát-kalciumklorid 175 ml meetilalkohollal készített 10 olyan oldatát csepegtetjük lassan, amely 2,0 ml 36%-os sósavat is tartalmaz. 12—15 órás reakcióidő után — mialatt az elegyet 50 C°-on tartjuk — erős keverés mellett 250 ml izopropanolít adunk a reakció elegyhez, A kivált csa- 15 padékot centrifugáljuk, 200 ml desztillált vízben oldjuk és 250 ml 'térfogatú Dowex 1X2 típusú, az anioncserélőt formiát alakban tartalmazó kromatografáló oszlopra visszük fel. Az oszlopot 500 ml desztillált vízzel mossuk és 0,05 n han- 20 gyasawal eluáljuk. A títidinfoszfát-kolin-lartaL mú frakciókat szárazra pároljuk, kevés vízben oldjuk, nátronlúggal semlegesítjük és etilalkohol hozzáadásával kristályosítjuk. Kitermelés: 3,2 g citidinfoszfát-kolin-nátrium- 25 só. 4 H>0 (az elméleti érték 90%-a). A CDP-kolin extinkciós koefficiense E2 6o pH 7,0-nél = 7,4 cm-f^mól. A CDP^koldnt a fentiekkel teljesen azonos 30 módon előállíthatjuk 80 C°-os reakcióhőmérsékleten is; ebben az esetben a reakcióidő 12—15 óráról 5—8 órára csökken. A kapott kitermelés azonos az 50 C°-on végzett reakcióéval. 35 5. példa: pH-ját tömény sósavoldattal 4,5-re állítjuk, a reakacióelegyet 4,5 pH értéken tartjuk további 10—15 órán át, amíg a reakció befejeződik. A reakcióelegyet vákuumban kb. 200 ml térfogatra töményítjük és 400 ml izopropanol hozzáadásával a képződött guanozindifoszfát-glükózt a reakcióelegyből kicsapjuk. A csapadékot vízben oldjuk, semlegesítjük és az 1. példában leírt módon IMAC—A 17 oszlopon tisztítjuk, szén-oszlopon sómentesítjük és metilalkohollal kicsapjuk. Kitermelés: 3,5 g GDP-glükóz~Na2 (az elméleti érték 40%-a). Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás nukleozid-difoszfátészterek előállítására valamely nukleozid-imonofoszforsav valamely foszforsavészterrel diciklohexil-karbodiimid jelenlétében történő reakciója útján, azzal jellemezve, hogy a nuklezoid-monofoszfoirsav és a diciklohexil-karbodiimid metilalkoholos oldatát, mely adott esetben valamilyen oldásközvetítő anyagot is tartmaz, 0 és 80 C° közötti hőmérsékleten, 5—15 órán keresztül a foszforsavészter 1—6,5 pH értékű metilalkoholos oldatával reagáltatjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy oldásközrvetítő anyagként morfolint alkalmazunk. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítása módja, azzal jellemezve, hogy a pH-értéket valamely víztartalmú, tömény halogénhidrogénsav-oldattal állítjuk be. Guanozindifoszfát-glükóz (GDP-glükóz) 40 5 g guanidin-5-mionofoszforsavat és 5-ml morfolint 100 ml desztillált vízben oldunk, majd kb. 15 ml térfogatra betöményítjük. Az olajos maradékhoz 100 ml metilalkoholt, 2 ml morfolint és 8 g diciklohexil-karbodiimidet (DCC) adunk. A reakciókeverékhez 50—55 C°-on lassú 45 keverés közben lassan hozzácsepegtetjük 15 g glükóz-1-foszfát-morfolinsó 500 ml metilalkohollal készített és tömény sósavoldattal 4-es pH-értékre beállított oldatát. A glükóz-1-foszfát adagolásának befejezése után a reakcióelegy 50 4. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítása módja, azzal jellemezve, hogy a foszforsavésztert valamely alkálifémr vagy alkáliföldfém-sójának alakjában alkalmazzuk. 5. A 4. igénypont szerinti eljárás foganatosítása módja, azzal jellemezve, hogy kalciumsót alkalmazunk. 6. Az 1—5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy foszforsavószterként kolinfoszfátot alkalmazunk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 7406482. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 4
