162900. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 6 alfa, 16 alfa-dimetil-21-hidroxi-pregna-1,4-dién-3,20 -dion-származékok előállítására
9 8. példa: 800 mg 9,a-klór-líjö',21-clihid:roxi-6a,16w-dimetil-l,4-pregnadién-3,20-diont 8 ml piridinben oldunk, az elegyet —10 C°-ra hűtjük, cseppen- 5 kernt hozzáadunk 0,96 ml izovajsavkloridot és 60 órán át körülbelül 0 C°-on tantjuk. A reakcióelegyet ezután jeges vízbe öntjük, a kivált terméket leszivatjuk, vízzel mossuk és vákuumban 40 C-o-n szárítjuk.A nyens termékeit aceton. 10 -hexánból átkristályosítjuk és a 207—208 C° olvadáspontú 97-klór-l LyS-hidroxi-21-dzobutiriloxi-6a,16a-dimetil-l,4-pregnadién-3,20-diont kapjuk . 15 9. példa: 0,5 g 21-acetoxi-6/r,16ií7-dirnatil-l,4,9(ll)-pregnadién^3,20-diont etilacetátban oldunk, hozzáadunk 2 g lítíunakloridot és körülbelül 0 C°-ra 20 hűtjük. Ezután ehhez a keverékhez hozzáadjuk 198 mg N-iklórszuikcinimid és 52 mg sósav 0,5 ml tetrahidrofuránnal előállított oldatát és 4,5 órán át szobahőmérsékleten kevertetjük. A terméket ezután jeges vízzel kicsapjuk, leszivat- 25 julk és metilénkloridban oldjuk. A metilénklo- k ridos fázist vízzel semlegesre mossuk, vákuumban beoároljuk és a maradékot éter-pentánból átkristáilvosítjuk. A 180—181 C° olvadáspontú 9a,l 1 /S-diklóir-l 21-! ace'toxi-6a,16ia-dimetil-l ,4-preg- 30 niadién-3,20-diont kapjuk. 10. példa: 35 300 mg 9ia,ll^-diklór-21-acetoxi-6T,16T'-dimeitil-l,4-pregnadién-3,20-diont a 7. példában leírt módon elszappanosítunk. A 205 C° bomláspontú 9a, 1 lij ö i -diklór-2 l-hidroxi-6ot, 16a-dimetil-l,4-pregnadién-3,20-dionit kapjuk. 40 11. példa: a) 5,6« g ll!/?-hidroxi-21-aoetoxi-6a,16ía-dimetil-4-pregnén-3,20-diom, 28 ml dimetilf ormamid, 4Í > 5,5 ml piridin és 2,6 ml matánszulfoinsavklorid keverékét 80 percen át nitrogénatmoszférában gőzfürdőn kevertetjük. A reakció befejeződése után az elegyet vízbe öntjük, a kivált terméket leszivatjuk és aceton-hexán gradienssel szilika- 5 ° gél-oszlopom kromaitografaljuk, 3,1 g 21-iacetoxi-6<7,16i"-dimeitil-4,9(ll)-pregnadién-3,20-ddont kanunk, amelyet 60 ml tetrahidrof uránban oldunk. Ehhez az oldathoz szobahőmérsékleten hozzács,ar>egtetünjk 25 ml 1 N perklórsavat, majd 55 4,55 g N4>rómszukemimidet. Az elegyet 30 percen át kevertatjük, majd beleöntjük 4.3 g nátriumszulfit 500 ml jeges vízzel elkészített oldatába és még 1 órán át kevertetjük. A kivált termékeit leszivatjuik és 30 C°-on vákuumban 60 szárítjuk. 3,0 g gia-bróm-ll^-hidroxi^i^aoetoxi-öajieia-dimetil-4-pregnén-3,20-dionit kapunk, amelyet 25 ml etanolban szuszpendáluak és hozzáadunk 65 10 5 g vízmentes káMumacetátot. A reaikcióelegyet ezután nitrogénatmoszférábain kevertetés közbea 1,5 órán áit forraljuk, hűlni hagyjuk és 300 ml jeges vízibe öntjük. Az elegyet egy órán át kevertetjük, a kivált terméket leszivatjuk, vízzel mossuk és 40 C°-on vákuumban szárítjuk. A kapott 21-acetoxi-9,lly?-epoxi-6ia,16a-dimetil-4-pregnén-3,20-diont (2,2 g) részletekben hozzáadjuk 7,5 ml folyékony hidrogénfluorid és 15 ml dimetilf ormamid—20 C°-ra hűtött elegyéhez. Az elegyet két napon át 0 C°-on kevertetjük, majd .beadagoljuk 30 ml cc. ammónia jeges vizes oldataiba. A kivált terméket lesizivatjuik, vízzel mossuk, a kapott nyersterméket metilénklorid-diizopropiléterből átkristályosítjuk. Így 2,1 g 198—200 C° olvadáspontú 9a-fluor-ll^-hidroxi-2lHacetoxi-6iai,16a-dimatil-4-pregnén-3,20-dioin:t kapunk. b) Egy 2 literes Erlenimeyer-loimbikot — amely 500 ml steril vizes táptalajt tartalmaz (ennek összetétele: 1,5% pepton, 1,2% kukorioalekvár, 0.2% MgS04 ) — beoltunk Bacillus lentus (ATCC 13805) Mfilizált, tenyészetével és 48 órán át 30 C°-on 145 ford./pere sebességgel rázatjuk. E baktérium-szuszpenzió 250 ml-ével beoltunk egy 20 l-es üvegfermentort, amely 14,75 1 ste^ rilezett tápoldatot tartalmaz. Ennek összetétele: 0,1% élesztőkivonat, 0,5% kukoricalekvár' és 0,005% keményíitőcukor. A tenyészetet 220 ford./ /perc kevertetési sebességgel 15 l/perc levegőztetés mellett 24 órán át 29 C°-on csíráztatjuk. Ebből az elő-fenmentációból 0,5 l-t átviszünk egy 20 l-es üvegferanentorba, amely 8 1 ugyanilyen összetételű steril táptalajt tartalmaz. A főfeirmentációhoz ugyanolyan műszaki körülményeket alkalmazunk, mint az előfermentáoióban. 8 órás növekedési fázis uitán 2 g 9-fluoir-ll^-hidroxi-21-iacetoxi-6ia,16ia-dimetil-4-pregnén-3,20-diorut /adagolunk 40 ml dimetilformamidban és fermentáljuk. Körülbelül 24 óira után a tenyészoldatot először 4 1, majd kétszer 3—3 1 .metiüzobutilketonnal keverjük ki. Az egyesített kivonatokat cirkulációs bepárlóban vákuumban 30—35 C°-on betöményítjük és rotációs bepárlóban max. 40 C° fürdő-hőmérsékleten vákuumban sízárazrapároljuk. A maradékot egy kevés hideg hexánnal habgáitlószermentesre mossuk és etilaoetáitból átkristályosítjuk. A 213—215 C° olvadáspontú 9a-fluor-l 1^,21--dihidroxi-eoí.lSot-dimetil-l^-pregnadién-S^O-diont kapjuk. 12. példa: 200 mg 9ia-fluor-llij(?-hidroxi-21-aoe!toxi-6of,16iof_dimeitil-l,4-pregnadién-3,20-diont 12 ml 96%-os acetonban oldunk, hozzáadunk 137 mg N-bróm-acetamidat és 3,5 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A reakcióelegyet ezután 60 ml vízbe öntjük és metilénkloriddal extraháljuk. 5
