162875. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-tirozin-O-szulfát-csoportot tartalmazó peptidek előállítására
11 162875 12 léten tartjuk. Összesen 22 óra. múlva 3,4 ml' ecetsavat adunk hozzá, és bepároljuk-. Az olajos maradékhoz 200 ml etilacetátot adunk, majd a terméket 75 ml éterrel kiesapjuk. A gélszerű csapadék kristályossá válik. A kristályos terméket szűrőre visszük, éterrel mossuk, és levegőn megszárítjuk. 100 ml forró vízmentes etanolban oldjuk, forrón szűrjük, és az oldatot lassan szobahőmérsékletre hűtjük. A kivált kristályokat szűréssel elválasztjuk» és levegőn megszárítjuk. d) terc-Buitoxikarbonil-glicil-Li-'triptofíl-L-mertionil-L-ialaníl-L-feiniknialíri-amid Ac) szakaszban kapott 7,5 g védett tetrapeptidet hiitrogénatmoszférában 30 ml trifluorecefeavban oldjuk. Szobahőmérsékleten való 15 perces állás u*äih ä trifluorecetsav zömét vákuumban eltávolítjuk,, és a maradékot 1 liter éterrel digeráljuk:: A szabad amiri^trifluoracetátot szűrőre.visszük, éterrel mossuk, és vákuumban nátriumhidroxid fölött szárítjuk. Hozam :7,98 g. A 7,98 g trifluoraoetátnak 40 ml dimetilformamidcial készült oldatához 1,8 ml trieitilamint adunik, és jégfürdőben lehűtjük. Ezután 4,72 g terc-butilpxikarbonil-glicin^nitrofenilésztert adunk hozzá, szobahőmérsékletre hagyjuk melegedni, és éjjelen át állni hagyjuk. A reakciókeverékeit bepárolva olajos maradékot kapunk. Az így kapott peratapeptidet 150 ml etilacetáttal kicsapjuk. A terméket szűrőre viszszük, és levegőn megszárítjuk. Forrásban levő metanolból átkristályosítjük. Hozam 5,2 g. Olvadáspontja 190—192 C°. e) íterc-Butoxikiarbbnil-L-imeitionil-glicil-L-tríptofil-L-metionil-L-alanil-L-fenilalanin-amid A d) szakasz szerint kapott 5,2 g védett penitapeptidet nitrogénatmoszféraban feloldjuk 21 ml trifluorecetsavbán. Szobahőmérsékleten való 15 perces állás után 800 ml étert adunk hozzá, és a kivált csapadékot szűrőre visszük, és vákuumban megszárítjuk. Hozam 5,3 g. Az 5,3 g így kapott itrifluoracetát 21,6 ml dimetilformamiddal készült oldatához 1,02 ml trieitilamint adunk, és jégfürdőben lehűtjük. Ezután 3,69 g terc-butoxikarboni'l-L-metionil-d>iklórfenilészterit adunik hozzá, és szobahőmérsékletre hagyjuk melegedni. Négy óra múlva a reakciókeverék semlegessé válik. Hozzáadunk még 0,05 ml trietilaminit, majd további 0,165 g terc-butoxikarbonil-L-metionin-triklórfenilésztert. Éjjelen át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, és másnap 0,165 g terc-butoxikarbonil-L-metionin-triiklórfenilésztert adunk hozzá. Három órával később (összes reakcióidő 23 óra) a reakciókeverékeit vákuumban bepároljuk, és a maradékot 100 ml etilaoetáittal digeráljuk. Ä pasztaszerű terméket kicentrifugáljuk, és 50 ml 95%-os. etilalkoholból kikristályosítjuk. Az így kapott hexapeptidet szűréssel elválasztjuk, és vákuumban nátriumhidroxid fölött megszárítjuk. Hozam 4,5 g. Olvadáspontja 202—204 C°. f) terc-Butoxilkarbonil-L-iaszparagil-L-tirozil-L-5 -metionil-glicíl-L-itriptofil-L-metíonil-L-alanil-L-fenilanalin-amid Az e) szakaszban kapott 1,0 g védett hexapepitidet nitrogénatmoszf érában 10 ml trifluor-10 ecetsavban oldjuk.' Szobahőmérsékleten való 15 perces állás után a reakciókeverékhez ' 200 ml éterit adunk. A kicsapódott trifluoracetátot szűréssel elválasztjuk, és vákuumban megszárítrjuk. Hozam 964 mg. 410 mg iterc-butoxilkarbönil-15 -L-aszparagil-L-tirozin-ihidrazidot szobahőmérsékleten 4 ml dimetilfoirmamidtoan oldunk, és az oldatot szilárd széndioxid^aoeton fürdőben —20 C°-ra hűtjük, őt perc múlva 0,48 ml sósavait adunik hozzá, és a hőmérsékletet 3 percre 20 —15 C°-ra hagyjuk emelkedni. Ezután hozzáadunk 0,5 ml 14%-os nátriumnitrit oldatot, és 5 perc múlva a hőmérsékletet —25 C°-ra csökkentve hozzáadunk 1,04 ml N-eitilpiperidint. Az így kapott 685 mg hexapeptid-trifluoraoetátbt 25 3,5 ml dimetUformamidban oldjuk, és hozzáadjuk a lehűitött hidrazid oldathoz. A reakcióit éjjelen át —50 C°-on lezajlani hagyjuk. Másnap reggel a felhasznált hidrazid oldat felének megfelelő mennyiségű hidrazid oldatot készí-30 tünk, és hozzáadjuk a reakciókeverékhez. Mintegy 34 óra múlva a reákciókeveréket az oldat mechanikus keverése közben hozzácsiepegtetjük 150 ml 0,2 n ecetsavhoz. A kicsapódott terméket centrif ugatással elválasztjuk, és vákuum-3S ban nátriumhidroxid fölött szárítjuk. Hozam 790 mg. Olvadáspontja 204—205 C°. g) L-Aszparagil-O-iszulfáto-LHtirozil-L-metionil-40 -glicil-L-itriptofil-L-metLonil-L-alanil-L. -fenilalanin-amid Az f) szakaszban kapott 750 mg terc-butoxikarbonil-L^aszparagil-L-<tirozil-L-rnietionil-glicil-45 -I^triptofil-L-metionil-L^alanil-L-fenilalainin-amidoit feloldjuk 21 ml vízmentes dimetilformw amid és 21 ml frissen desztillált piridin elegyesben. Az oldathoz hozzáadjuk 954 mg piridinszulfátnak 21 ml dimetilformamiddal készült 50 oldatát. A kapott oldatot 17 óra hosszat szobahőmérsékleten itartjuk. majd vákuumban bepároljuk. A száraz maradékot több ízben 15—15 ml vízzel mossuk, és vákumuban megszárítjuk. Hozam 344 mg. A nyers oktapeptid^zulfátot 55 0,1 mólosvizes ammóniumkaijbonát oldatban oldjuk, és DEAE-Sephadex A—25 oszlopon kromaitografálva tisztítjuk. Ultraibolya spektrum: /•max 287 m^ (« 3830). R/-értéke 0,75. Amino* sav-összetétele (savas hidrolízissel meghatározr 60 va): Aso (1.0), Gly (1,0), Ala (0,95), Met (1,85), Tyr (1,08), Phe (1,04). Az 1—5. példákban kiindulási anyagokként használt isimert vegyületek előállítása a kövefr-65 kező közleményekben van részletesen leírva: 6
