162875. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-tirozin-O-szulfát-csoportot tartalmazó peptidek előállítására
7 162875 (« 4900). R/-értéke 0,73.) Aminosav-összetétele (savas hidrolízissel megállapítva): Asp (2,0), Tyr (1,0), Met (2,0), Gly ,(1,0), Phe (1,0). v3. példa: L-ia-Aminobutiiril-O-szulfáto-L-tirozil-Lr-mieitionil-glicil-L-triptofdl-L-metionil-L-asziparagil-L-fenilalanin-^amid a) terc-Butoxikarbonil-L^a^aminobutiril-L-tirozin-hidrazid 4,0 g L-tirozin-N-benziloxiikarbonil-hidrazidat 32 ml dimetilformamidban oldunk, és a 0 C°-ra hűtött oldathoz 1,5 ml trietilaminit, majd 3,8 g terc^butoxikarbonil-LHorrnamiinovajsav-itriklórfenilésztert adunk. A reakciókeveréket szobahőmérsékleten 16 óra hosszait állni hagyjuk, majd 200 ml etilacetáttal hígítjuk, és 50 ml 20%-os citromsawal, majd 3 ízben 50—50 ml vízzel mossuk. Nátriumszulfáton való szárítás és vákuumban való bepárlás után olajos maradékot kapuink, ez izopropiléterrel digerálva kristályossá válik. A terméket megosztjuk 4 : : 2,5 : 2,5 : 1 arányú metanol-toluol-kloroform-víz rendszerben 250 transzferálással. A K = 1,9 frakciót vákuumban bepároljuik, és a maradékot izopropiléterrel digeráljuk. Hozam 150 mg. Olvadáspontja 70P/o-os etanolból átkristályosíitva 158—161 C°. b) terc-Butoxikarbonil-I^aHaminobutiril-L-tirozil-L-metionil-glicil-L-triptiofil-L-metionü-L-aszparagil-L-fenilalanin-amid 147 mg terc-buitoxi'karbonil-L^a-aminobutiiril-L-tirozin-hidrazidöt feloldunk 1,6 ml dimatilformamddban, és az oldatot szilárd széndioxiid-laceton fürdőben —15 C°-on tartjuk. Hozzáadunk 0,186 ml sósavat, majd —15 C°^on való 3 perc állás után hozzáadunk 0,194 ml 14%-os nátrdumnitrit áldatott, és a hőmérsékletet még 3 percig —15 C°-on tartjuk. Ezutána keveréket —20 C°-ra hűtjük, és hozzáadunk 0,39 ml N-etilpiperidint. 325 mg L-metionil-glicil-L-triptofil-L-metionil-L-aszparagil-L-fenilalanin^amid-trifluQraeetätot 0,5 ml dimetilformamidban oldunk, és hozzáadjuk a fentiek szerint készült hűtött hidrazid oldathoz. A reakciót 0 C° alatti hőmérsékleten 2 napig lezajlani hagyjuk. Ezután a reakcióikeveréket 40 ml 3%-os 0 C°-os ecetsavba öntjük, és a kicsapódott nyers terméket szűréssel elváliasztjuk. 10 ml 95%-os etilalkoholból átkristályosítva és vákuumban megszárítva 181 mg cím szerinti terméket kapunk. Olvadáspontja etilalkoholból ártlkristályosítva 197—199 C°, c) L^a-Aminobutiril-0-szulfáto-L-tirozil-L-metianil-glicil-L-triptofil-L-'metionil-L-aszparägdl-L-ferulalanin-amid 170 mg (0,15 mmól) terc-butoxikarbonil-L-ja1 -aminobutiiril-L-tiriOiZil-L-metionil-glicil-L-tripitío-fil-L-metionil-L-iaszparagil-L-fenilalanin-amidot feloldunk 9,6 ml vízmentes dimetilformamid és 9,6 ml frissen desztillált piridin elegyében. Ehhez az oldathoz hozzáadjuk 480 mg piridin^ 5 szulfátnak 9,6 ml dimetilformamiddal készült oldatát. A kapott oldatot 17 óra hosszat szobahőmérsékleten tartjuk, majd vákuumban bepároljuk. A száraz maradékot (fcöbb ízben 15—15 ml vízzel mossuk, és vákuumban megszárítva 10 170 mg reakcióterméket kapunk. Ezt a nyers vegyületet 20 percig 5 ml trifluoreoetsavva] reagáltatjuk. A savat vákuumban eltávolítjuk, és a kapott trifluoracetátoit dietiléterrel digeráljuk, majd megszárítjuk. A nyers okitapeptid^szulfá-15 tot 0,1 mólos ammóniumkarbonát oldatban oldjuk, és DEAE-Sephadex Ä—25 oszlopon kromatpgrafálva (tisztítjuk. Az 1,5 cm átmérőjű és 12 cm magas oszlopot összesen 350 ml 0,1 mólos és 350 ml 1,5 mólos vizes ammóniumkarbonát 20 oldatokból készült lineálisan növekvő koncentrációjú elegyekkel eluáljuk, 7 ml-es frakciókat gyűjtünk, és 253 m/A-nál észlelhető ultraibolya elnyelésre vizsgáljuk. A 46—68. frakciókat egyesítjük, és liofilizálva 10,3 mg terméket kapunk. 25 Ultraibolya spektruma: ^max 288 my* (* 4410). R/-értéke 0,6. Aminosav-összetétele (savas hidrolízissel megállapítva): Asp (1,05), Gly i(l,0), Abu (1,0), Tyr (1,18), Phe (1,2). 4. példa: L-Alanil-O^szulfáto-L-tirozil-L-metionil-glcil-L-triptofil-L-metionil-L-aszparagil-L-35 -fenilalanin-amid a) terc-Butoxikarbonil-L-alanil-LHtirozin,-hidrazid 40 A 3. a) példában leírt módon L-táirozin-N-benziloxdkarbonil-hidrazidot terc-butoxikarbonil-L-alanin-triklórfenilészterrel reagáltatva a címben megnevezett hddrazidot kapjuk. 70%-os etanolból átkristályosítva 175—177 C°-on olvad. 45 b) terc-Butoxikarbonil-L-alanil-L-tirozil-L-metionil-glicil-L-triptofil-L-metionil-L-aszparagil-L-fenilalaninHamid 136 mg iterc-butoxikarboonil-L-alanil-L-tirozin-hidrazidot feloldunk 1,5 ml dimetilformamidban, és az oldatot szárazjég-jaceton fürdőben —20 C°-ra hűtjük, öt pedc múlva hozzáadunk 55 0,173 ml sósavat, és a hőmérsékletet 3 percre —15 C°-ra emeljük. Ezután hozzáadunk 0,18 ml 14%-os nátriumnitrit oldatot, majd —20 C°-ra hűtjük, és hozzáadunk 0,375 ml N-etilpiperidlnt. 302 mg L-metionü-gucil-L-Ériptofil-60 -L-metionil-L-aszparagil-L-fenilalanin^amid-trifluoracetátot 0,86 ml dimatilformamidban oldunk, és hozzáadjuk a lehűtött, fentiek szerint készült hidrazid oldathoz. A reakciót 0 C° alatti hőmérsékleten lezajlani hagyjuk. Két nap múlva 65 a reakciókeveréket 35 ml 3-os 0 C°-os ecetsav-4
