162834. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikum kinyerésére és tisztítására

162834 9 10 első eluátum az aktivitás 76%-át tartalmazza — 18-szor hatásosabb, mint a kiindulási anyag — és a második eluátum, mely az aktivitás 17%-át tartalmazza, 14-szer hatásosabb, mint a kiindulási anyag. Az így kapott két oldatot egyesítjük. •"> 61 ml-re tovább betöményítjük és hígított nátriumhidroxiddal pH 4-ről pH 5-re állítjuk be. Ez a koncentrátum 40 mg ml száraz anyagot tartalmaz és 1 : 100 hígításban (400 mcg/m'í) Vibrio percolans ATCC 8461-el vizsgálva 25 ml 10 zóna-átmérőt mutat. A termék azonos a 7-(D-5-amino-5-barboxivaleramido)-3-(karbamoiloxímetil) -7-metoxi-cef-3-ém-4-karbonsav mononátriumsójával. 3. példa: 4. példa: 15 Elválasztás gélszűréssel Az 1. példa C) lépése szerint kapott 3—18. egyesített frakciókból 22 ml-t hígított nátrium- 20 hidroxiddal 7,0 pH-ra állítunk be és 388 ml Bio-Gél P—2 oszlopon kromatografáljuk (metilén-bisz-akrilamiddal térhálósított poliakrilamid gyöngy). Az oszlopot vízzel mossuk, az elfolyó oldatot differenciál-refraktorméteren vizsgáljuk 25 és äz 5ml-es frakciókat automatikusan egyesítjük, majd biológiai vizsgálatnak vetjük alá. A biológiai aktivitás a 47—63. frakciókban, míg a nátriumklorid a 62—72. frakciókban jelenik meg. Az 50—60 frakciókat egyesítjük, szárazra 30 bepároljuk és így 10,8 mg, főleg 7-(D-5-amino-5-karboxivaleramido)-3-(karbamoiloximetil)-7--metoxi-cef-3-ém-4-karbonsav mononátrium sóját tartalmazó anyagot kapunk. A terméket Vibrio percolans-al vizsgálva 8 mcg/ml-nél 25 35 mm zónaátmérőt kapunk. 40 Elválasztás dextrán-gélen A 3. példa szerint 7-(D-5-amino-5-karboxivaleramido)-3-(karbamoiloximetil)-7-metoxi-3-cef-3-ém-4-karbonsav mononátriumsóját (1,0 g) 20 ml 1% vizet tartalmazó n-butanolban oldjuk és 45 2.53 ml Séphadex G—10 gyöngyformájú módosított dextrángélből készített oszlopon kromatografáljuk. Az oszlopot ezután 1% vizet tartalmazó n-butanollal 10 ml/perc átfolyatással eluáljuk és 10^5 ml-es frakciókban gyűjtjük. Az 50 elfolyó oldatot regisztráló refraktométeren mérjük és a frakciókat biológiai vizsgálatnak vetjük alá. A biológiai aktivitás a 99—122. frakciókban jelenik meg, melyeket összeöntünk és szárazra pároljuk. Az így kapott 670 mg súlyú 55 termék a 7-(D-5--amino-5-karboxivaleramido)-3-(karbamoiloximetil)-7-metoxi-3-cefém-4-karbonsav mononátriumsója, kevés melléktermék mellett. ' Ezt követően az oszlopot Blue Dextran 2000 é^ nátrium klorid keverékével, azonos körülmények között, kromatografálva kalibráltuk be. A Blue Dextran 2000-t a 85—93., a nátriumkloridot pedig a 140—155. frakciókban észleltük, mely azt jelenti, hogy a biológiailag aktív termék az ilyen természetű szennyeződésektől elválasztható. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás az (I) képletű antibiotikum, a 7-(D-5-amino-5^karboxivaleramido)-3-(karbamoiloximetil)-7-metoxi-cef-3-ém-4-karbonsav vagy sójának kinyerésére az antibiotikumot tartalmazó nyers vizes oldatból, azzal jellemezve, hogy a fermentlevet, vagy az antibiotikumot tartalmazó oldatot valamely ioncserélő gyantával, így anioncserélő gyantával, előnyösen sztirol-divinilbenzol alapú gyantával, vagy erősen savas kationcserélő gyantával töltött oszlopon folyatjuk át, majd a gyantán adszorbeált anyagot adott esetben valamely sótartalmú oldószerrel eluáljuk, az eluátumokat frakciókba gyűjtjük és az aktív frakciókat egyesítjük, az egyesített frakciókat a) 200—2000 mólsúlyú poliakrilamid-gélen kromatografáljuk és az adszorbeált anyagot vízzel eluáljuk, vagy b) az antibiotikumot aktív szénnel adszorbeáltatjuk és ezt követően vizes acetonnal eluáljuk, vagy c) gyöngyformájú módosított dextrén-gélen kromatografáljuk és az adszorbeált anyagot 1% vizet tartalmazó n-butanol oldattal eluáljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az eljáráshoz valamely kvaterner ammónium-ioncserélő csoportot tartalmazó stirol-divinilbenzol alapú polimer anioncserélő gyantát alkalmazunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az eljáráshoz valamely, a gyűrűben szulfonsav-ioncserélő csoportot tartalmazó stirol-divinilbenzol alapú polimer kationcserélő gyantát alkalmazunk. 4. A 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az eljáráshoz eluáló oldószerként vizes, vagy vizes-alkoholos sóoldatot használunk, mely só vízoldható alkálifémsó vagy ammóniumsó. 5. A 3. igénypont szerinti eljárás fogánatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az eljáráshoz valamely szerves bázist vagy ammóniumhidroxidot alkalmazunk eluáló oldószerként. 1 rajz A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó Igazgatója. 7406458. Zrinyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 5