162830. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (-)-(cisz-1,2-epoxipropil)-foszfonsav-amidok előállítására
162830 10 X<=91 g KH2 P0 4 és 95 g. Na2HP04, desztillált vízzel 1 térfogatra kiegészítve. A közeg pH-ját sterilizálás előtt 6,5-re állítjuk. A beoltott lombikot forgó rázógépen 24 órán át 28 C°-on inkubáljuk. 10 ml így kapott fermentlével egy 250 ml-es Erlenmeyer-lombikban újabb 50 ml, a fentivel azonos összetételű steril közeget oltunk be. A lombikot forgó rázógépen 24 órán át 28 C°-on inkubáljuk, majd a kapott fermentlével 5 literes fermentorban levő 3 liter steril táptalajt oltunk be. A táptalaj összetétele a következő: deti eluátum összegyűjtése' után az oszlopot 200 ml vízzel átöblítjük, az aluátumfrakciókat egyesítjük és vákuumban 100 ml-es végtérfogatra bepároljuk. A koncentrátum pH-ját óvatosan 5 adagolt savciklusú Dowex 50 gyantával 5,0-ra állítjuk, a savas oldatot szűrjük és szobaihőmérsékleten vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 100 .ml metanolban felvesszük, és a szervetlen sókat szűréssel eltávolítjuk. A szűr-10 letet kis térfogatra betöményítjük, 100 ml izopropanollal elegyítjük, és a bepárlást kristályképződésig megismételjük. A kristályszuszpenziót körülbelül 16 órán át hűtőszekrényben tároljuk, a kristályokat szűrjük. (—)-(Cisz-l,2-epoxipropil)-íoszfonsav-jmono-(+)-ia-fenetilammóniumsót kapunk, amelynek olvadáspontja: 129— 15 g/liter 132 C°. Őrölt zabliszt 30 Oldható cefre 10 Szójababliszt 25 20 Szabadalmi igén Nátriumcitrát 4 Nátriumaszkorbát 0,5 1. Eljárás az Víz q.s. v égtérfogatig O O Z 25 • / \ II / A közeg pH-ját sterilizálás előtt 6,5-re állít-H3 C—CH—CH—P R, juk. \ / N A beoltott közeget ezután keverés közben 4 \ napig 28 C°-on inkubáljuk, és a fermentlét 30 R4 3 liter/perc sebességű levegőárammal levegőztetjük. A habzás meggátlására 3 ml 2000 fölötti molekulasúlyú propilénglikol-polimert (a Dow Chemical Company cég által Polyglycol P—2000 néven forgalomba hozott termék) adunk az 35 elegyhez. A kapott fermentlé aktivitása standard, Proteus vulgaris-szal végzett meghatározás szerint 5,9 egység/ml. A fenti módon második fermentációt is vég- 40 zünk. A fermentlé aktivitása 6,75 egység/ml. A két fermentáció során kapott fermentleveket egyesítjük és szűrjük. A kapott szűrt lé ml-ként 20 mg szilárd anyagot tartalmaz, és a módosított vizsgálati módszer szerint 1 : 32-es 45 hígításban képez Proteus vulgaris-sal szemben 25 mm-es gátló zónát. 96,5 ml így kapott fermentlevet 40 percig 2,5 g, savval kimosott alumíniumoxiddal kéve- 50 rü'nk. Az elegyet szűrjük és a szűrlet aktivitását megvizsgáljuk. Ä szűrlet aktivitása az eredeti érték 20%-a. A kiszűrt alumíniumoxid-adszorbátumot 11,2 pH-jú vizes ammóniaoldattal mossuk és eluáljuk. Az eluátumot bepároljuk. A maradék a módosított vizsgálati módszer szerint 0,125 mg/ml hígításban képez 25 mm-es zónát, ' B) 200 mg szilárd anyagot tartalmazó 10 ml 60 vizes (—)-(dsz-l,2-epbxipropil)-foszfonsav-ammóhiumso-óldatot vízzel 50 ml-re hígítunk, és az oldatot (-)-)-ia-fenetilammónium-ciklusú Dowex 50 kationcsérélő gyantán bocsátjuk keresztül. A gyanta ülepített térfogata 200 ml. A kez- 65 I általános képletű (—)-t(cisz-l,2-epoxipropil)-foszfonsav-amidok előállítására — ahol -Rí Z —0-(rövidszénláncú)-alkil- vagy '—N \ Ra általános képletű csoportot jelent, Rí, R2, R3 és R4 egymástól függetlenül hidrogénatomot vagy valamely alkilgyököt képvisel, mimellett R2 és R 3 együttesen 2—4 szénatomos alkilén-gyököt is képviselhet, vagy Rí és R2 és/vagy R3 és R4 a nitrogénatommal együtt, amelyhez kapcsolódik, morfolinogyököt is jelenthet —, azzal jellemezve, hogy valamely O O 55 H3 C—CH—CH—P X II II általános képletű (—)-(cisz-l,2-epoxipropil)-foszfonsav-^zármazékot — ahol X és Y halogénatomot vagy —O-alkil-csoportot jelent, azzal a feltétellel, hogy az X és Y gyökökne'k legalább az egyike halogénatomot képvisel — valamely primer vagy szekur»der aminnal reagáltatunk. 5
