162732. lajstromszámú szabadalom • Eljárás oleandomicin előállítására
162732 lek — melyek pontosan reprodukálhatók volnának — inam szerepelnek, megállapítható, hogy törzsünk termelőképessége a szakirodalomban [találhatókhoz hasonló komplex táptalajokon lényegesein, magasabb, mimit az isimert törzseké. IEZ a körülmény, •walaminlt az attakunk alkalmazott táptalaj összetételének pomtos illesztése magas termelőképeBségű törzsünk termelési igényeihez, eredményeztek, hogy eljárásunkkal 3800 y/wú feiimenitáaiós szintet értümk el az ismert eljárásokkal elérhető 2000 yficrú. alatti szintekkel szemben. Eljárásuinlkiait laz aláhbd kiviteli példáival ismertetjük: A Streptornyces antihiortáous A—89 törzs spórás tenyészetét Czapek-agiarira oltattuk. A beoltott tenyészetet 2i8 °C-on infcubáltuk 8 napig, majd a ibespórázott 'tenyészet sterilitását ellenőriztük, és annak apóratarbailimiát fiziológiás nátriiumikilorlid oldattal lemostuk. Az így előállított spóraszuszpenzió 1—i5 X108 spórát tartalmazott. Az előfermenitáeió oltására a fientli mennyteégű spórás tenyészetet alkalmaztunk. Az előfermentációt 1 m3 Hes fceverős ifermentoriban végeztük, melylban a Ikeverő konistaukidióia az 500 1 fenmranifflé kevertetése esetlén 1 kW áramfelvételt eredményezett. Az előfermenltáció során alkalmazott táptalaj összetétele a következő volt: Barsóliszt 12 % Kfukoricalekvár I(Í1I00%-OÍS) 0,5 % Szacharóz 1,-7 % Kukoricaliszt 3 % Burgonyalkernényítő 1,6 % AmmóndumisEiulfiát 0,4 % KáliiuindMidirogénfoszfát 0J03I% Ralciumkarfoonát 0,6 % Napraforgóolaj 0,4 % 10 15 20 25 30 35 40 mentáció során alkalmazott táptalaj összetétele és előkészítése teljesen megegyezett iaz előfermentáció során alkalmazott táptalajéval. Oltás előtt azomiban elhbe a táptalajba 1'% n-propilalkoholt adagoltunk sterilre szűrve. A beoltás után' a fermentáció a következőképpen fejlődött: A pH oltás után néhány órával süUyadini kezdett, majd fokozatosan emelkedésnek dndiullt és 125 órás komra elérte a 7,45 értéket. A kieményítiő és szacharóz a (fermentáció első harmadaiban intenzíven fogyott, ebben az időszakiban mennyiségének 2/3na tfelhasanálódott. Ezt követően a szénhidrát fogyasztás sebessége lelassult és asz antSIbtotikum iképződlési sebessége fokozódoföt. A fermentáció oleandomycin itantalltma 105 órás koiriban 3000 y/mL volt. A fermentálás sarán haibzásgátilókéht napraforgóolajait alkalmaztunk. Ennek adagolását olyan ütemiben végeztük, amilyen ütemben a fermentáció tabzása azt megkívánta. A fermentácáó 'befejezése után a fiermenitlevet keretes szűroprésen leszűrtük, majd a szűrtlevet a következő ismert eljárással dolgoEltuk fél a hatóanyag kinyerése oéljlálból. Nátóumlhidiroxiddal a szűrte pH-ját 10,0^a állítottuk, és a szűirtlevet 50% Ibuitilacetáitltal extraháltuk. Ezt követően az oleandomäicin itamtalmú oxiganiktus fázishoz 30 térf J% 0,6%HOS foszforsaviat adagoltunk, mellyel a pH-t 2 értekre állítottuk, majd sreextraiháltuirík. Eat követően az elválasztott etálacetátos fázisit koncentráltuk, majd szűréssel itfiisztítoíttuk, ezt követően a koncentrált etilaoetátos lextrakitumlból 15%HOIS foszfarsawal az oleandomioinit kicsaptuk, a csapadékot szűrtük, etilacettáttal mostuk, majd megszárítottuk. 1OT6 y/rrú. oleandiomidn hozamot értünk él, 45 .ami azt jelenti, hogy kitermelésünk 612%-os volt. A táptalaj pH-ját sterileres előtt 6,i9-ire állítottuk; a sterilizálást 1,2 aifcü túlnyomáson 45 percen keresztül végeztük. A itenyésztés 1 :1 arányú levegőztetés mellett 28 °C-on történt, állanidó kevertetés mellett. A ibeoltás után ,24 órával jelentek meg az első mioóliunHszálak, majid az előfieanmentáoió 65 órás korára vált oltásra ériettté. iEkkor a fermentáció pH-ja ßß volt. . A főfermentáoió oltására a fenti módon elkészített 500 i elöfermentáciát alkalmaztuk. A íőfemraentáeiót 6 m3 -es keverés fermentoriban végeztük, melyben a keverő konstrukciója a 4000 1 fermenitlé kevertetése során átlagosan 8 kW áramfelvételt eredményezetit. A főfer-Szahadalmi igénypontok: 50 1. Eljárás oleandomycin fermentációs előálií"tíására ismert alkotókból álló komplex táptalajon azzal jellemezve, hogy a Streptomvces aratíbioifäcus A—Í8I9 (deponálási szám: OKI 00071) törzsiét borsóÜsztet, kukorioalekfváirt, szaahairózt, 55 kiikoirioailiiisBtiet, proipilalkoíholt, Ibua^onyalkeményítőt, lammóniumiSZulfátDit, káliumdMdrogénfoazfátot, IkaMumfcarlboniátoit és/vagy egyéb puffereket, niapraforgóolajait és/rv.aigy egyéb haibzásgátló adalékokat tartalmazó táptalaijon süly-60 lyesztetit kulitürában levegőziteittve és kevertetve tenyésztjük, majd a fermemtléből a imlcéliiumot kiszűrve a hatóanyagot a szűrtléből ismert eljárással kinyerjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás fqganialto-65 sításá módja iazzal jéUiemaieavie, hogy Ibonsióliiszitiből 2
