162729. lajstromszámú szabadalom • Eljárás krisztályos kanamicinhidroklorid-sók előállítására
7 162729 8 Olvadás- , „ ,, , Sor- P£ pont Oldhatóság szám ^-f* Bomlás- vízben 20 mg/ml pont 25°C-on Szín 215 "C 2 mg/ml fehér krémszín 215 °C 2 mg/ml fehér krémszín 215 °C 2 mg/ml fehér krémszín 215 °C 2 mg/iml fehér krémszín 10 Kanamkáintetrahidnoklorid-tartalomra vonatkozó vizsgálat: 1 4,1 2 4,0 3 4,0 4 4,0 Sorszám Számított Talált 730 mcg/mg 730 mcg/mg 730 mcg/mg 730 mcg/mg 725 mcg/mg 725 mcg/mg 730 mcg/mg 735 mcg/mg 15 20 2. példa: Kristályos kanamicinhidrokloridot oly módon készítünk, hogy 30 graimim toaraamiKin-ibazißt feloldunk 20 ml vízben és a kapott oldathoz keverés közben lassan hozzáadunk 9,76 ml tömény sósavat. Ezután 50 ml metanolt adunk az oldathoz, majd megszűrjük. A megszűrt oldatot 50 °C-ra melegítjük. Ugyancsak 50 °C-ra melegítünk 50 ml izopropanolt és ezt keverés közben a megszűrt oldathoz adjuk lassú ütemben. A keverést még tíz percig folytatjuk. A kapott oldatot két óra hosszat jégszekrényben tartjuk, amikoris a kristályosodás csaknem befejeződik. A kristályos anyagot éjszakán át 4 °C-on tartjuk, a kristályokat szűréssel elkülönítjük és 40 "Cnom vákuumban számítjuk. Ez az anyag aibban az esertíbein, ha a sitamdand-oidaitnak megfelelő mennyiségben oldjuk vízben, 7,3 pH-val rendelkezik. Klorid-analízis szerint a klór mennyisége 11,89—12,07% (az elméleti 12,6%Ha). E kanamirintetrahidrokloridra pálcika alakú kristályok voltak jellemzők. Optikai forgatóképesség [ÍCÍ|25 D —108,3°, elméleti molekulasúly: 25 626,5. Kanamicindi- és trihidrokilorid-tartalomra végzett vizsgálat: Só diiMdrolklorid trihidroklorid Számított 7915 imcg/img 746 mcg/mg Talált 800 mncg/img 770 mcg/mg A kanamicinsók biológiai aktivitásának meghatározására turbidimetrilkus módszert alkalmaztunk (lásd: Antibiotics Annual 1958—1959, 790—795. old., G. V. Lamoy and J. H. Lannon: Modified Two—Point Turbidimetric Assay for Kanamycin). Azt találtuk, hogy a kanamicintetrahidroklorid toxicitása (LD50 egéren) a kanamicinszulfát toxicitásához hasonló mértékű. 1. példa: 30 35 40 45 Kristályos kanamicintetrahidrokloridot úgy készítünk, hogy 200 gramm kanamicin-bázist feloldunk 130 ml tömény sósav és 100 ml víz elegyében. A kapott oldathoz 15 gramm aktívszenet adunk és az elegyet 37 °C-on 30 percig óvatosan keverjük. A reakcióelegyhez ezután 330 ml metanolt adunk és az aiktívszenet szűréssel eltávolítjuk. A kapott áitláitszó oldatot 50 °C-ra melegítjük és 330 ml izopropanolt adunk hozzá. Az oldatot lassan kihűlni hagyjuk és időnkint a kristályosodás befejeződéséig megkeverjük. A kristályos csapadékot szűréssel elkülönítjük és vákuumban 40 °C-on szárítjuk. A kitermelés 230 gramm (az elméleti hozam 93,3%-a) kristályos anyag, amely abban az esetben, ha 500 mg/ml kanamicin-bázis aktivitásnak megfelelő mennyiségben oldjuk vízben, 4,2 pH-jú oldatot, például standard-oldatot szolgáltat. 65 50 55 60 3. példa: •/ Kanamicinhidrokloridot úgy készítünk', hogy 30 gramm kanamicin4>ázist 15 ml víziben szuszpendálunk és a kapott szuszpenzióhoz lassan hozzáadunk 14,65 ml tömény sósavat.' Az öszszes kanamicin feloldódása után 50 ml metanolt adunk az oldathoz és a szilárd anyag eltávolítása végett megszűrjük. Szűrés után a kanamicinhidroklorid kristályosodni kezd. A kristályokat elkülönítjük, körülbelül 30 ml metanollal mossuk és csökkentett nyomáson szárítjuk. A kitermelés 31,2 gramm pálcika alakú kristályókból álló vegyület. Amennyiben a standard-oldatnak megfelelő mennyiséget oldunk vízben, a kristályos anyag pH-ja 6,6. A kristályos anyag elemzésnél 9,12% nitrogént és 15,45% klórt mutat. A kanamicintrihddrokloridban az elméleti nitrogén-tartalom 9,20%, a klórtartalom pedig 17,49% i(a kanamicin trihidroklorid monohidrátként fordul elő). 4. példa: Kanamieinmonohidroklorid-sót úgy kapunk, hogy 30 gramm kanamicin-bázist 30 ml vízzel szuszpendálunk és az ily módon készített szuszpenzióhoz 4,88 ml tömény sósavat adunk, mimellett a reakcióelegy hőmérsékletét 20 és 30 °C között tartjuk. A kapott oldathoz ezután 50 ml metanolt adunk, utána pedig az elegyet 5 percen keresztül keverjük, majd szűrjük. A megszűrt oldathoz 50 ml metilénklorid és 80 ml izopropanol elegyét adjuk és a kapott oldatot keverés közben vízfürdőn 60 °C-on melegítjük mindaddig, míg a kristályosodás meg nem kezdődik. A reakcióelegyet eltávolítjuk a vízfürdőről és hűlni hagyjuk, amikoris kikristályosodik. Az oldatot 50 °C-ról 60 °C-ra újból felmelegítjük és lassú ütemben 20 ml izopropanolt adunk 4
