162542. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dextranáz enzim előállítására

162542 Az eljárásunk szerint előállítható fermentlevek aktivitása azonos módszerrel mérve, mint amit az 1 949 719 lsz. NSZK szabadalom leír, az idézett 13 perc felezési időhöz viszonyítva többszörösen magasabb értéket mutatnak: a Penicil- 5 lium sp DF—123 fermentlevelei százhússzor, a Fusarium DF—80 fermentlevei tizenkétszer magasabb aktivitásúak, mint az NSZK szabadalomból idézett Chaetomium gracile F—212—8 fermentleve. 10 A tennék ipari léptékű kinyerését illetően a fermentlé magas aktivitása mellett további előnyt jelent azonban az általunk alkalmazott egyszerű kinyerési technológia, mely a kisózott terméket enzim-szubsztrát komplex formájában 15 való átcsapás útján állítja elő. Az így előállított enzim-szubsztrát komplex por magas enzimaktivitását szobahőmérsékleten 1 évig változás nélkül megőrzi. Eljárásunk kivitelét az alábbi példákon szem- 20 léltetjük: 1. példa: A Penicillium DF—123 törzs spórás felületi 25 tenyészetével a 2% maltózt, 0,5% kazein hidrolizátumot, 0,25% nátriumnitrátot, 0,1%; káliumkloridot, 0,001% hét kristályvizes vasszulfátot tartalmazó steril táptalajt beoltottuk, s 1,2 m? hasznos térfogatú f érmen torban 1,6 szulfit érté- 30 ket eredményező kevertetés mellet 48 órán át tenyésztettük. A tenyésztés induló pH-ja 5 volt, ami 48 órás korig fokozatosan előbb csökkent, majd emelkedett pH 6-ig. ' ' 36 Az így nyert inokulum fermentációból 10%r nyi mennyiséget oltottunk át 3% dextránt, 2% kukoricalekvárt (100%-os), 0,8% nátriumnitrátot, 0,05% kaliumhidrofoszfátot, 0,05% magné- 40 ziumszulfátot, 0,001% het kristályvizes vasszulfátot, 0,2% kalciumkarbonátot, 0,2% nátriumkloridot tartalmazó táptalajba. A tenyésztést ezen a táptalajon 1,2 m3

hasznos térfogatú fermentorban 2,0 szulfit-értéket eredményező ke- 45 vertetés mellett végeztük. A tenyésztés induló pH-ja 5 volt, ami a fermentáció folyamán fokozatosan és egyenletes ütembén emelkedett 7,7 értékig. A fermentlé csúcsaktivitását 120 órás korban 50 érte el. Ekkor a fermentlé aktivitása 1080 egység/iml volt. [Mérési módszer: Tsucihiya (1952) J. Bact. 69, 513—519.] A fermentléből a micéliumot szűréssel távolitottok el, majd a szűrtléből 50% ammóniumszulfáttal az enzimet ki- 55 sózással a szűrtlében levő enzimaktivitás 70%^át nyertük ki a fehérje csapadékból. Az így előállított fehérje csapadéknak, mint nyersterméknek aktivitása 25 egység/mg volt. 60 Az így nyert nyersterméket tízszeres menynyiségű desztillált vízben felszuszpendáltuik, 12 óráin át +5 °C-on állni hagytuk, majd az elegyből az oldhatatlan anyagokat) oanitrifugálással eltávolító ttuik. A tiszta oldathoz |10% 5j2-aoetát ipuf- 65 fent adtunk. <A puifíereaett oldat hőmérsékletét 30 °C-ra állítottuk, majd a kiindulási nyerstermékre számított 7%-nyi mennyiségű dextránpulvist adagoltunk hozzá. A dextrán hozzáadását követő 2 perc várakozás után az elegy hőmérsékletét 0 °C-ra hűtöttük, majd a 0 "C-os elegyhez 1,5 térfogatnyi —5 °C hőmérsékletű etilalkoholt adagoltunk. Az etilalkohollal ilyen módon kicsapott anyagot, ami tartalmazta az enzim-szubsztrát komplexet, centrifugálással nyertük ki, majd vákuumban szárítottuk. Az előállított termék aktivitása 210 egység/mg volt, a szűrt fermentiere számított termékkihozatal 45% volt. 2. példa: A Fusarium DF—80, törzs spórás felületi tenyészetet felhasználva az 1. példában leírt eljárás szerint végeztük el a tenyésztést. A tenyésztés inokulum fázisában az induló pH 5 volt, ami 40 órás korig előbb fokozatosan csökkent, majd emelkedett 6,4 értékig. A fermentáció induló pH-ja 5 volt, ami a fermentáció folyamán fokozatosan és egyenletes ütemben emelkedett 8,4 értékig. A fermentlé csúcsaktivitását 145 órás korban érte el. Ekkor a fermentlé 110 egység/ml volt. A fermentlé feldolgozását az 1. példában leírt eljárás szerint végeztük. A szűrtléből 50% ammóniumszulfáttal az enzimaktivitás 72%r

át nyertük ki a fehérje csapadékban. Az így előállított fehérje csapadéknak, mint nyersterméknek aktivitása 22 egység/mg volt. Az 1. példában leírt finomfeldolgozási eljárással előállított termék aktivitása 185 egység/ /mg volt, a szűrt fermentiere számított termékkihozatal 42% volt. 3. példa: A Penicillium DF 123 törzset az 1. példában leírt eljárás szerint tenyésztettük. Á tenyésztés inokulum fázisában az induló pH 5 volt, ami 48 órás korig élőbb fokozatosan csökkent, majd emelkedett 6,2 értékig. A fermentáció dextrán tartalmát ezúttal olyan dextrán fermentlé hozzáadagolása útján biztosítottuk, melyből a dextrán bioszintézise során képződött fruktózt Sacharomyces cerevisiae hozzáadásával és levegőztetett viszonyok mellett 16 órán át emésztettük el. A tenyésztés végén a dextrán fermentlébe a mono- és diszaharidok mennyisége 0,8%-nyi volt. A tenyésztés feltételei egyébként teljesen megegyeztek az 1. példában leírt eljárással. A fermentáció induló pH-ja 5 volt, ami a fermentáció folyamán fokozatosan emelkedett 7,5 értékig. A fermentlé csúcsaktivitását 144 órás korban , érté el. Ekkor a fermentlé aktivitása 950 egység/ml volt. A fermentlé feldolgozását az 1. példában leírt eljárás szerint végeztük. A szűrtléből 50% 1