162446. lajstromszámú szabadalom • Eljárás daganatsejtek szaporodásának szelektív gátlására alkalmas kivonatot tartalmazó készítmény előállítására
162446 6 1. táblázat kontroll 3.75-10« 11,25-10« DCI/g testsúly DCI/g testsúly X.Mi 25 18 8 28 11 10 19 8 30 24 13 12 28 (i 12 10 3 14 23 8 10 15 22 9 xlli 21,0 12,7 12,0 s 7,5 4,9 7,9 P (I•II) (I-III) <0,05 <0,05 10 15 tani metszetein sem mutattak a kontroll és kísérleti sorozatok Mi-értékei szignifikáns különbséget. A kapott középértékek: thvmusk = 11, thvmus D(I = 13,1; léPk = 12,1, lép Da = 12,7. A sejtciklus represszióját (végső soron a mitotikus index redukcióját) létrehozó faktor tehát in vivo alkalmazás esetén, ugyanabban a rendszerben is sejtspecifikusnak bizonyult. Az eljárás leírása: Az eljárás lényege, hogy a proliferáló sejtekhez homológ, de differenciált normál sejtek kivonatát adagoljuk meghatározott koncentrációban. A proliferáló sejtek típusa szerint választjuk meg a kiindulási anyagot. Shay kloroleukémia esetén (a) patkány peritoneális exudátum sejtekből, ill. (b) humán vérből készült leukocyta koncentrátumot, és (c) defibrinált borjúvérből izolált granulocytákat használunk fel. 3,75-106 leukocyta homogenizátumból kivont DCI/g testsúly tehát már gátolja a csontvelő myeloid elemeinek proliferációját. E kísérletünk ismétlésekor a reprodukálhatóságon kívül a sejtspecifikus hatást is vizsgáltuk. Ebből a célból a csontvelőn kívül a thymus és lép mitotikus indexét is regisztráltuk. A 2. táblázat a csontvelőből, illetve thymusból készített sejtszuszpenziók összehasonlító adatait tünteti fel. 2. táblázat csont vele ! thymus kontroll 3,75-10« kontroll 3,75-10« DCI/g DCI/g testsúly testsúly XMÍ 30 7 15 6 23 9 13 21 24 12 7 15 8 11 16 11 34 9 10 7 24 11 6 16 31 10 10 19 22 6 19 15 26 10 6 9 20 18 9 11 27 6 14 9 15 8 13 10 23 4 2 11 XMÍ 23,6 9,3 10,8 12,3 s 6,8 3,5 4,8 4,6 p <0,001 >0,1 A táblázat értékeiből leolvasható, hogy a granuloid DCI az adott in vivo körülmények között 60,6%-kal csökkentette a csontvelő mitotikus indexét, de nem befolyásolta a hasonló eljárással preparált thymus sejtekét. A Helly-oldatban fixált, paraffinba ágyazott és hematoxilin-eozinnal festett thymus és lép szövet-50 55 60 20 Kiviteli példák: (1) 100—120 g-os egészséges, laboratóriumi fehér patkányokban 40 mg glikogén/5 ml Tyrode-oldat befecskendezésével steril gyulladást idéztünk elő. 180 perc múlva steril fecskendővei 5 ml Tyrode-dal átmosva leszívjuk a peritoneális folyadékot, amely 80% neutron!, 5% eozinofil granulocytát és 15% mononukleáris sejtet tartalmaz. Bürker kamrában sejtszámolást végzünk és a továbbiakban a Q = 1,2 aránynak megfelelő differenciált peritoneális sejtet használunk fel. A sejteket 1000 ford/perccel 10 percig centrifugáljuk, majd 10—10 ml Tyrode-oldattal kétszer átmossuk. A szupernatánst leöntve az üledéket n. 0,2 ml Tyrode-oldat ban Potter homogenizátorral 10 percig homogenizáljuk. A szuszpenziót 2000 ford/perccel a felgyorsulástól számított 2 percen át centrifugáljuk. A felülúszó kerül felhasználásra sejtkultúrákhoz történő adagolással. A felülúszó -f 4 °C-on 10—12 órán át tárolható. A felülúszót liofilizáljuk, majd 3,75-106 differenciált sejt kivonatát tartalmazó adagokra osztjuk. 25 30 35 40 (2) Azonos vércsoporthoz tartozó egészséges donorok vérét +4 °C-on 4 órán keresztül szedimen°L 45 táljuk. A szupernatáns 75% granulocytát, ill. 25 lympho- és monoeytát tartalmaz. A további eljárás megegyezik az 1. sz. kiviteli példában leírttal. (3) Defibrinált borjúvért azonos térfogatú, 0,85%os NH4 Cl-al 5 percen át hemolizáltatunk, 1000 ford/perccel 5 percig centrifugálunk. Üledékét Tyrodeoldatban szuszpendáljuk és 1000 rpm-mel 3 percig centrifugáljuk. A további munkamenet ugyancsak egyezik az (1) alatt leírtakkal. Minden egyéb leukémia típus esetén a homológ differenciált sejt extraktumának aliquot mennyiségét alkalmazzuk. Szabadalmi igénypont Eljárás egészséges, differenciált sejtekből készült, azokkal homológ daganatsejtek (leukémiasejtek) 65 szaporodását gátló kivonatot tartalmazó készítmény 3
