162446. lajstromszámú szabadalom • Eljárás daganatsejtek szaporodásának szelektív gátlására alkalmas kivonatot tartalmazó készítmény előállítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGALATI TALÁLMÁNY 162446 V Bejelentés napja: 1970. XII. 23. (MA—2175) Közzététel napja: 1972. VII. 28. Megjelent: 1974. VIII. 31. Nemzetközi osztályozás: C 07 g 17 00 (A 61 k 27 10) Bejelentés napja: 1970. XII. 23. (MA—2175) Közzététel napja: 1972. VII. 28. Megjelent: 1974. VIII. 31. T ORSZÁGOS ALÄLMÄNY HIVATAL I Bejelentés napja: 1970. XII. 23. (MA—2175) Közzététel napja: 1972. VII. 28. Megjelent: 1974. VIII. 31. \ Feltalálók: Dr. BALÁZS András biológus. 50" Dr. FAZEKAS Ilona orvos, 25% FAZEKAS Istvánná asszisztens, BLAZSEK István biológus, 10% Budapest 15% Tulajdonos: Magyar Tudományos Akadémia Kísérleti Orvostudományi Kutató Intézet, Budapest Eljárás daganatsejtek szaporodásának szelektív gátlására alkalmas kivonatot tartalmazó készítmény előállítására Az eljárással előállítható kivonat daganatsejtek (leukémiasejtek) szaporodásának szelektív gátlására alkalmas. Citológiai alapkutatásaink során a differenciálódás, a dedifferenciálódás és a mitotikus kapacitás összefüggéseit vizsgáltuk. Bebizonyosodott, hogy a differenciálódás során a sejtek osztódóképessége megszűnik ugyan, de nem irreverzibilisen. Adataink alapján feltételeztük, (Balázs: Exp. Geront. 5,1970, 209—217) hogy a differenciált, heteroszintetikus sejtekben intracellulárisan specifikus gátlóanyag képződik, amely represszor-szerű hatása révén meggátolja a sejteket, hogy újabb cikluson haladjanak végig és mitózisba kerülhessenek. A továbbiakban a differenciálódási ciklus-inhibitort (DCI) kísérletben is sikerült előállítani és bebizonyítani, hogy meghatározott koncentrációban proliferáló normál, vagy leukémiás sejtekhez adva azok mitotikus indexét jelentősen csökkenti; ugyanakkor más származású, heterotyp sejtek élettevékenységét nem befolyásolja. Az általunk extrahált DCI kiindulási anyagát, kivitelezési technikáját és alkalmazásának módját illetően alapvetően eltér az eddig alkalmazott rákellenes szerektől. Utóbbiak többsége ugyanis, köztük az Országos Találmányi Hivatalban 143 471, 149 746, 154 485 és 155 987 sz. szabadalmi leírásban foglaltak, aspecifikus hatásúak: a daganatsejteken kívül a heterotyp ép sejteket is elpusztítják, toxikus hatásúak. A DCI ezzel szemben fiziológiás anyag, 10 15 20 25 30 egészséges sejtekből származó kivonat, amely csak a homotyp sejtek ciklusát blokkolja: granulocyták a granuloid prekurzorokét és myeloid leukémiákét, a lymphocyták a fiatal lymphoid sejtekét és a lymphoid leukémiákét. Ilyen módon jelen eljárás megvalósítja a feladat legáltalánosabb megoldásait olyan módon, hogy egészséges emberi vagy emlős szervezetekből származó differenciált sejteket szedimentálással izolálunk, feltárjuk, és fiziológiás sóoldattal extrahálva az inhibitort, a kivonattal homotyp daganatokat kezelünk. Sejtkultúrák esetén az extraktumot a tenyésztőfolyadékkal elegyítjük: in vivo terápiánál intraperitoneális injekciókat alkalmazunk. Fontos a kezelt és extrahálásra használt sejtek aránya. A DCI biológiai hatása: a hatást elsősorban in vitro shortterm (rövid inkubálási idejű) szuszpenziós kultúrákban teszteltük, az 1000 interfázisos sejtre eső mitózisok (MI) regisztrálásával. Kísérletenként 30—50 000 sejtet számoltunk le. Felhasználtunk (a) normál patkány csontvelő sejteket, (b) Shay kloroleukémiás patkány csontvelő sejteket és (c) HeLa sejttenyészeteket. Koncentráció függés: Első kísérleteinket normál patkány csontvelő kultúrákon végeztük; az inhibitort patkány peritoneális exudátumból állítottuk elő. Kitűnt, hogy az alacsony és magas DCI koncentrátumok hatástalanok, optimális gátlás 1—1,2 millió peritoneális sejt extraktum/3 millió csontvelő sejt arány esetén érhető el. A továbbiak során, előző 162446 I