162200. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-glutamináz előállítására

162200 13 tán-2,5-diolt, amíg zavarosodni kezd. 3 napon át hűtőszekrényben tartjuk az oldatot, ezalatt végbemegy a kristályosodás. A kristályokat centrifugálással elkülönítjük, majd kétszer mossuk 60%-os vizes etanollal, és egyszer mossuk tiszta etanollal. Termelés: 36 mg. A készítmény aktivitása 135 E/mg. A nem L-aszparaginázra specifikus enzimaktivitás 91 E/mg. A specifikus aktivitás további átkristályosítással már nem növelhető. 13. példa 50 mg L-glutaminázt, melynek aktivitása 128 E/mg, feloldunk 1 ml trisz-pufferoldatban, melyben előzetesen feloldottunk 3% nátriummolibdátot (pH = 8,5), és az oldathoz annyi 2-metilpentán-2,5-diolt adunk, amennyi ahhoz szükséges, hogy megzavarosodjék. 4 órán át hűtőszekrényben tartjuk az oldatot, azalatt végbemegy a kristályosodás. A kristályok külleme feltűnően más, mint a 12. példa szerinti eljárással kapott kristályoké. A továbbiakban a 12. példában leírt módon járunk el. Termelés: 28 mg; E/mg = 131. A nem L-aszparaginázra specifikus aktivitás további átkristályosítással ebben az esetben sem növelhető. 14 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás adott esetben kristályos L-glutamináz előállítására, azzal jellemezve, hogy Pseudo-5 monas aureofadens ATCC 13 985 sejteket acetonnal kezelünk, az így előkezelt sejteket vízzel vagy foszfát-, citrát- vagy borátpufferrel extraháljuk, és az így kapott extraktumból az enzimet acetonnal, egy 4—8 szénatomszámú vízold-10 ható diollal, 3-metoxi^butanollal vagy egy 400—6000 molekulasúlyú polialkilénglikollal való kicsapással, adott esetben a kicsapás ismétlésével kinyerjük. 15 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az enzim kicsapásához 2-metil-pemtán-2,4-diolt használunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az enzim ki-20 csapásához 2,5-hexándiolt használunk. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az enzim kicsapásához 2-metil-pentánr-2,5-diolt használunk. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosí-25 tási módja, azzal jellemezve, hogy az enzim kicsapásához polietilénglikolt használunk. 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az enzim kicsapásához polipropilénglikolt használunk. 1 rajz A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatóía. 74.6383/4 — Zrínyi Nyomda, Budapest. F. v.: Bolgár Imre vezérigazgató 7